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文献和实验γRⅢ/Ⅱ 结合，封闭非特异性染色，使阴性细胞的背景荧光降至未标记细胞的水平。加入 0.5-1 μg 纯的抗小鼠 CD16/32 单克隆抗体，室温孵育 10 分钟。 对于人和大鼠，可直接使用过量的，与荧光抗体相同来源和亚型的纯化 Ig 或者与目标种属相同来源的血清进行阻断，或者用商业化的 Fc 受体阻断剂。 五、细胞染色 按照说明书的推荐用量加入荧光标记抗体，混匀后置于 4℃，避光孵育 30 分钟。 加入细胞染色 buffer (或含 1%BSA 的 PBS)重悬细胞，300g 离心
FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy
能和 FcγR Ⅲ/Ⅱ结合，封闭非特异性染色，使阴性细胞的背景荧光降至未标记细胞的水平。加入 0.5-1μg 纯的抗小鼠 CD16/32 单克隆抗体，室温孵育 10min。 对于人和大鼠，可直接使用过量的与荧光抗体相同来源和亚型的纯化 Ig 或者与目标种属相同来源血清进行阻断，或者用商业化的 Fc 受体阻断剂。 五、细胞表面抗体孵育 根据实验设计，除空白对照外，对应的单染管、全染管加入相应的抗体 5μL，混匀，4℃ 避光孵育 30min。 六、固定破膜 按照说明书稀释固定破膜液。 每管加入
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