Biosharp BL670A 细胞核蛋白和胞浆蛋白提取试剂

Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 产品编号 产品名称 规格 BL670A 细胞核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 50T BL670B 细胞核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 100T 产品简介： 细胞核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒( Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit )用于从哺乳动物组 织和培养细胞中提取核蛋白或胞浆蛋白，提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性， 并且纯度较高，具有非常高的蛋白提取效率。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实 验(gel shift assay)、免疫共沉淀、WesternBlot、ELISA、酶活性测定等后续蛋白质研究。 产品组成： 使用方法： 一．实体组织蛋白的提取 1. 将组织剪切成小块，取 50mg 组织样本加入 900µL Buffer A 和 100µL Buffer B（使用前每 mL Buffer A 加入 17μL 100mM PMSF，1μL 蛋白酶抑制剂）混匀置于冰上匀浆，静置 30min； 2. 4ºC，1000~1500×g 离心 10min。收集上清至新的离心管中，即为胞浆蛋白； 3. 在离心沉淀物中加入 200μL 预冷的 Buffer C (使用前每 1mL Buffer C，17μL 100mM PMSF，1μL 蛋白 抑制剂)，涡旋剧烈振荡 15s，放置冰上 30-60min，每间隔 10min 涡旋剧烈振荡 15s； 4. 4℃离心，14000×g，30min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白（注：如欲提高 最后核蛋白的纯度，注意离心后的沉淀去干净避免残留）； 5. 上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford 法或 BCA 法），分装并保存于-80℃，避免反复 冻融。 二．培养细胞蛋白提取： 1. 取培养细胞 5×106 ～1×107个/mL，4℃离心，800×g，3 min 收集细胞，弃去培养液，用预冷的 PBS 洗 涤两遍； 2. 用移液枪尽可能取去上清，勿留残液； 3. 加入预冷的 Buffer A 450µL 与 50µL Buffer B（使用前每 1mL Buffer A，17μL 100mM PMSF，1μL 蛋白 酶抑制剂），混匀，放置冰上 30min； 4. 4ºC，1000~1500×g 离心 10min。收集上清至新的离心管中，即为胞浆蛋白。 组分 BL670A BL670B Buffer A 50mL 100mL Buffer B 5mL 10 mL Buffer C 10mL 20mL 1000×蛋白酶抑制剂 55μL 110uL PMSF（100mM） 1150μL 2250uL 5. 在离心沉淀物中加入 100μL 预冷的 Buffer C (使用前每 1mL Buffer C，17μL 100mM PMSF，1μL 蛋白 酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡 15s，放置冰上 30-60min，每间隔 10min 涡旋剧烈振荡 15 s； 6. 4℃离心，14000×g，30min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；（注：如欲提高 最后核蛋白的纯度，注意离心后的沉淀去干净避免残留） 7. 上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Bradford 法或 BCA 法），分装并保存于-80℃，避免反 复冻融。 注意事项： 1、 所有的试剂及器具均需预冷后使用； 2、 细胞的数量不应少于 0.5×10 7个/mL； 3、 对于提取的蛋白质，可以采用我公司生产的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒（BL521A）或 Bradford 蛋白 浓度测定试剂盒（BL524A）对提取样品中的蛋白质进行定量。 4、 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放 于普通住宅内。 5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 保存条件： 4℃保存；1000×蛋白酶抑制剂和 PMSF（100mM）-20℃储存；有效期一年
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