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两年
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江苏天净沙
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2ug
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文献和实验值,若OD260 /OD280 > 2. 0,表明DNA 中含有RNA杂质。若OD260 /OD280 1. 2. 3 质粒DNA单酶切后的电泳检测[ 2 ] 分别取四种方法得到的质粒DNA 1μl,进行酶切。反应体系为20μl,在0. 5ml Eppendorf管中依次加入ddH2O,10 ×酶切反应缓冲液, BSA, 1μg质粒DNA,限制性内切酶Sma Ⅰ0. 5μl, 于37℃酶切2h, 加适当loadingbuffer混匀上样, 在0. 8%琼脂糖凝胶上电泳,采用5V / cm的电压
消化所需的限制性内切酶的量。一般说来,线性DNA比超螺旋DNA更易消化。比如,酶切1uglambdaDNA,需要1-2单位的酶,而酶切1ug质粒DNA,需要3-5单位的酶。 6)使用限制性内切酶的一般步骤是什么? 一般步骤如下: A)测试酶切DNA的量 B)计算完全酶切所需的酶量。为使终体积中甘油的浓度低于8%,计算能加的酶量,最多能加终体积的10%(甘油的浓度为5%)。 C)10X反应液的体积应为终体积的1/10;10X反应液的体积不应小于
And Recleavable Blunt Ends一文。 三、 酶 内切酶一旦拿出冰箱后应当立即置于冰上。酶应当是最后一个被加入到反应体系中(在加入酶之前所有的其它反应物都应当已经加好并已预混合)。酶的用量视在底物上的切割频率而定。例如,超螺旋和包埋法切割的DNA通常需要超过1U/μg的酶才能被完全切割。参见目录第244和264之"切割质粒DNA"和"包埋法切割DNA"。 四、 DNA 待切割的DNA应当已去除酚、氯仿、乙醇
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