pZFHD1-2质粒DNA

成功进行双酶切实验之实战手册

+HindIII对质粒DNA进行双酶切，以便进行某基因的克隆。 那么，我们建议，同时设计并进行三种酶切反应： A: EcoRI+HindIII 双酶切 B: EcoRI单酶切 C: HindIII单酶切 在酶切时，ABC三种酶切反应都用相同的buffer系统，相同的DNA量（建议至少0.5ug）， 所需的酶量用DDDesigner进行计算。在合适的温度（37度）酶切1-2个小时， 然后进行电泳分析。电泳分析时，添加两种对照：D:未酶切的质粒DNA和分子量标准

质粒DNA的碱裂解法提取与纯化

12000g × 10min。 7. 小心移出上清于一新微量离心管中，加入2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀，室温放置2-5min，4℃离心12000g×15min。 8.1ml预冷的70%乙醇洗涤沉淀1-2次，4℃离心8000g×7min，弃上清，将沉淀在室温下晾干。 9. 沉淀溶于20μl TE（含RNase A 20μg/ml），37℃水浴30min以降解RNA分子，-20℃保存备用。 三、质粒DNA的电泳检测    观察琼脂凝胶中DNA的最简单

利用碱裂解法提取与纯化质粒DNA

发射出来。因此，当凝胶中含有游离溴化乙锭时即可以检测到少量的DNA。 取制备的质粒DNA 1-2μl，加适当loading buffer混匀上样,采用 1-5V/cm的电压，使DNA分子从负极向正极移动至合适位置，取出凝胶置紫外灯下检测，摄片。 四、注意事项 本裂解法小量制备质粒 DNA重复性好，一般无麻烦。若所提取质粒 DNA不能被限制性内切酶 切割，可通过酚/氯仿再次抽提，以清除杂质来解决问题。