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- BestBio-贝博
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- 中国
- 2025年07月12日
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BestBio-贝博
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100 assays
贝博® BBcellProbe® PI染色试剂盒可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。 Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。也可采用流式细胞仪利用细胞形态上的改变影响它们的光散射特性改变进行分析，还可与RNase A结合进行细胞周期分析。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
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文献和实验本染色试剂盒用于细胞染色分析，也可用于细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰固定后检测。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，细胞染色可用预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时，也可不固定，其他方法请参阅相关资料。
染色缓冲液的配制：
根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100μL试剂B加900μL无菌纯水稀释，混匀即成染色缓冲液。
荧光显微镜观察
1. 收集细胞，PBS洗涤细胞一次，1000×g离心5分钟，用染色缓冲液重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；
2. 取100ul细胞悬液，加入2-5ul PI染液，轻轻混匀；
3. 4℃避光放置5 min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；
4. 荧光显微镜检测。
流式检测：
1. 收集细胞，PBS洗涤细胞一次，1000×g离心5分钟，用染色缓冲液重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；
2. 500ul细胞悬液中加入5-10ul PI染液；
3. 在4℃避光放置15-30 min；
4. 流式细胞仪检测。
结果分析 ：
置于荧光显微镜下用488nm激发光观察结果：正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。
流式检测用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；
在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。
1.Yan Lu, et al.
PFR peptide, one of the antimicrobial peptides identified from the derivatives of lactoferrin, induces necrosis in leukemia cells
Sci Rep. 2016
2.Wei Feng, et al.
Flower-like PEGylated MoS2 nanoflakes for near-infrared photothermal cancer therapy
Sci Rep. 2015
3.Zhang Feng, et al.
Effect of yellow capsicum extract on proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes
Nutrition 2013
4.Jie Gao, et al.
Induction of apoptosis of gastric cancer cells SGC7901 in vitro by a cell-free fraction of Tibetan kefir
International Dairy Journal 2013
5. Li-Na Zhu, et al.
Novel cytotoxic exhibition mode of antimicrobial peptide anoplin in MEL cells, the cell line of murine Friend leukemia virus-induced leukemic cells
Journal of Peptide Science 2013
, stained with propidium iodide (P1304, P3566, P21493) and visualized by confocal laser-scanning microscopy. This photomicrograph clearly shows that the green-fluorescent lectin staining outlines the apoptotic surface blebs, whereas the red-fluorescent
是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化，而此阶段Propidium Iodide（PI）不能通过细胞膜。细胞坏死时，虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，但此时细胞膜的通透性明显增加，PI等核酸染料进入细胞与细胞核中的核酸结合，发出红色荧光。所以Annexin V-FITC(绿色荧光)常与鉴定细胞死活的核酸染料（如PI
Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
