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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
Pepsin Antigen Retrieval Solution(0.4%)
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
100mL
胃蛋白酶抗原修复液(0.4%)
规格:100mL
保存:-20℃保存,一年有效。
产品简介:
组织在制作过程中,由于化学试剂的作用封闭了抗原,又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲,致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来,为了解决上述的问题,利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。柠檬酸盐、EDTA 或 Tris 等缓冲液在热的条件下可以使被福尔马林屏蔽的抗原重新暴露出来,同时又不会对抗原表位造成破坏,从而提高抗原的检出率,降低背景染色,提高诊断的准确率。在热诱导抗原修复法出现之前,胰蛋白酶、蛋白酶 K、胃蛋白酶等酶类的诱导的表位修复是最常用的方法。
胃蛋白酶抗原修复液能暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。通常石蜡切片都需进行抗原修复处理,而冰冻切片可以不进行抗原修复处理,抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果,亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时,可考虑进行抗原修复。按照每个片子需要 10ml 抗原修复液(1×)计算,100ml 抗原修复液可以用于 10 个样本的抗原修复。
使用方法:
操作步骤 (仅供参考) :
(一) 石蜡切片
1、脱蜡至水
①二甲苯 3 次,每次 3~5min。
②无水乙醇脱水 2 次,每次 3~5min。
③95%的乙醇,3~5min。
④90%的乙醇,3~5min。2. 对于冰冻切片:
⑤80%的乙醇,3~5min。
⑥70%的乙醇,3~5min。
⑦蒸馏水冲洗 2 次,每次 3~5min。
2、抗原修复:将切片浸泡在胃蛋白酶抗原修复液中,37℃孵育 10~25min。
3、免疫染色洗涤液或自来水洗涤 1~2 次,每次 3~5min,彻底漂洗干净。
4、进行后续的免疫染色步骤。
(二) 冰冻切片:
1、免疫染色洗涤液或自来水洗涤切片 5min。
2、抗原修复:将切片浸泡在胃蛋白酶抗原修复液中,37℃孵育 10~25min。
3、免疫染色洗涤液或自来水洗涤 1~2 次,每次 3~5min,彻底漂洗干净。
4、进行后续的免疫染色步骤。
(三) 其它样品:
其它样品参考石蜡切片或冰冻切片进行操作。
注意事项:
1、 胃蛋白酶抗原修复液恢复至室温后再使用,但应避免反复冻融。
2、 浸泡在胃蛋白酶抗原修复液中,最佳孵育时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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文献和实验一、SP 法 1)脱蜡、水化;2)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;3)3% H2O2(80% 甲醇)滴加在 TMA 上,室温静置 10 分钟;4)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;5)抗原修复;6)PBS 洗 2~3 次各5分钟;7)滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗 50μl,室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9)4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10)PBS 洗 3 次各 5 分钟;11)滴加 Ⅱ 抗 40~50 μl,室温
抗原修复方法 Antigen Retrieval Methods
技术即可检测到特定抗原。 恢复表位免疫反应性的方法有很多种。即使是改变抗体稀释液的pH值或阳离子浓度这样简单的方法,也能影响抗体与其表位的亲和力。对于部分掩蔽的表位,在进行抗原修复之前,可以先尝试延长一抗的孵育时间。然而,这一步骤也需要进一步优化,包括合适的抗体浓度、孵育时间和温度。在讨论抗原修复方法时,通常将其分为两大类:蛋白酶诱导表位修复(PIER)和热诱导表位修复(HIER)。一旦优化,抗原修复的效果将非常显著。 蛋白酶诱导表位修复(PIER) 在PIER方法中,蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶
不完全:使用正常山羊血清或 1%~5% BSA 封闭 1h。 (5)离子相互作用造成的背景:降低抗体稀释液的离子强度。 (6)切片或细胞过于干燥或孵育温度过高:实验过程中请保持切片处于湿润状态,一抗孵育时尽量使用 4℃ 过夜孵育。 (7)内源性过氧化物酶残余:适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 (8)样本于缓冲液或抗原修复液中浸泡太久:样本在溶液中浸泡时间不要超过 24h。 Q4:为什么会出现非特异性染色,如何避免? (1)抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加非特异性染色:由于本试剂盒使用
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