5×Tris-MES-SDS-PAGE蛋白电泳缓冲液

蛋白分离的不连续缓冲系统的比较

在电泳开始的时候，SDS-PAGE 利用不连续系统，在浓缩胶中浓缩或"堆积"样品，使其成为一条非常锐利的区带。在不连续缓冲系统中，最初胶中的阴离子不同于（或不连续）电泳缓冲液中开始时的阴离子。NuPAGE系统（Bis-Tris和Tris-Acetate）和Laemmli(Tris-Glycine)系统二者均为不连续系统的例证，以相同的方式起作用。但是，作为NuPAGE系统中不同离子的结果，这个系统在一个较低的pH值下工作。Tris-Glycine系统（图1）的情况，主要包括三种离子： a)氯

Western-blot经验谈

们的问题没有满意的解释,但可能会对大家的理解带来些许的帮助,也希望大家能提出意见和建议,在你们这些大侠面前献丑真是不好意思! 首先有必要对整个蛋白电泳的背景有些了解: 如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Lammli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法,这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多,而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题,而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已,所以阐述如何操作的文字只有那么一小段(但相当经典),这是SDS-PAGE

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

2～4 h，使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连； 免疫沉淀反应后，在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3～4 次；最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液，沸水煮 5 分钟； SDS-PAGE，Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜