KHM-5M人甲状腺癌细胞（未分化）

产品信息
名称    KHM-5M (人甲状腺癌细胞(未分化)) (STR鉴定正确)
别称    KHM/5M; KHM5M
种属    人类
年龄（性别）    男性，65岁
组织来源    甲状腺未分化(间变性)癌；转移部位:胸腔积液
生长特性    贴壁细胞
细胞形态    成纤维细胞样
生物安全等级    1
推荐传代比例    1:3-1:6
推荐换液频率    2~3次/周
倍增时间    ~27小时(JCRB)
冻存条件    
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件    
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
保藏机构    JCRB; JCRB0148

细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
注意：客户收到细胞后按照下面的要求操作：培养瓶里面的培养液是不含药物的。待细胞长到 70-80%的汇合度时，去掉培养液，加入含 500ng/ml Taxol 药物的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧，通过换液可以去掉，下面的细胞待长满就可以消化传瓶了，这时可以一直用含药培养液来消化培养细胞，一两代之后可以将药物浓度提高到 1000ng/ml，含药培养液用于细胞培养都没问题的，冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022，添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙，酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%，添加PS，1%，Taxol000ng/ml。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。