人间充质干细胞高效扩增试剂盒 Human MSCs Robu

产品名称：人间充质干细胞高效扩增试剂盒 Human MSCs Robust Expansion Kit
产品简介

人间充质干细胞高效扩增试剂盒 Human MSCs Robust Expansion Kit适用于在体外培养人脐带、脂肪、牙髓等多种组织来源的间充质干细胞。

产品优势

 无异源成分
 无菌，无支原体，低内毒素
 可支持人脐带血，脂肪，牙髓，胎盘来源间充质干细胞的快速增殖。
操作步骤：
人间充质干细胞无血清完全培养基的配制：
1. 于实验开始时前一天，将培养基添加剂 A 从-20°C 冰箱中取出，置于 4°C 冰箱中直至完全溶解；
注意：
1）请勿将培养基添加剂 A 从-20°C 冰箱中取出后直接置于 37°C 中；
2）培养基添加剂 A 溶解完全后轻轻摇晃瓶身，使其成份均一，摇晃时，请小心避免气泡产生；
3）解冻时，若有蛋白沉淀产生属于正常现象，配制成完全培养基后会渐渐溶解，并继续提供营养物质。
2.在将培养基瓶拿进超净台之前，用 75%酒精对其表面进行消毒；
3.将培养基添加剂 A 和 B 加入到人间充质干细胞基础培养基中；
4.吸取基础培养基洗涤瓶身内壁，并重复操作一次，尽可能使培养基添加剂全部加入到基础培养 基中；
5.轻轻摇晃基础培养基瓶身，使各成分混合均匀，摇晃时，请避免气泡产生。将配制好的人间充 质干细胞无血清完全培养基置于 2-8°C 保存。
人间充质干细胞的复苏：
1.准备好 37°C 水浴；
2.超净台中，取 5mL 人间充质干细胞无血清完全培养基于 T25 瓶中（可根据实际复苏的细胞量选 择培养容器与培养基体积），并将培养瓶置于 37°C，5% CO2 培养箱中孵育 30min；
3.超净台中，取 10mL 人间充质干细胞完全培养基于 15mL 离心管中，待用； 注意：无需将人间充质干细胞无血清完全培养基预先水浴至 37°C，以免影响培养基中生长因子 的活性。
4.从液氮中取出冻存的人间充质干细胞，置于-80°C 冰箱中挥发管中液氮，而后迅速将冻存管置于 37°C 温水中，并快速晃动冻存管，使其内含物尽快融化，待冻存管内含物融化完全后取出；
注意：
1）尽可能将冻存管的内含物全部浸没于 37°C 温水中，使内含物均匀融化；
2) 请勿使温水没过冻存管盖的螺口以防污染;
3) 细胞复苏的操作过程要迅速，避免影响细胞复苏后的活性。
5.在将冻存管拿进超净台之前，用 75%酒精对其表面进行消毒；
6.轻轻重悬细胞，并将其移入待用的装有 10mL 人间充质干细胞完全培养基的 15mL 离心管里；
7.用 1mL 培养基再次冲洗冻存管，并将此悬液移至离心管中，轻轻吹打混匀；
8.室温下，300g 离心 10min；
9.倾去上清，往沉淀加入 2-3mL 的人间充质干细胞完全培养基，轻轻吸打均匀；
10.从细胞培养箱中取出已预先孵育 30min 的 T25 瓶，吸去培养瓶中的液体；
11.将细胞按 0.8-1.0×104 个活细胞/cm2 的密度接种到 T25 瓶中，并加入足量的人间充质干细胞无 血清完全培养基，轻轻摇晃培养瓶，使细胞分布均匀；
12.将细胞置于 37°C，5% CO2 的细胞培养箱中培养；
13.第二天，更换新鲜的人间充质干细胞无血清完全培养基；
14.每隔两天更换一次新鲜的培养基，直至细胞生长至 80-90%的汇合度。
人间充质干细胞的传代：
1.将 PBS，胰酶置于 37°C 水浴锅中预热；
2.超净台中，吸去培养瓶中的培养液；
3.轻轻加入 5mL PBS 于 T25 瓶中，轻轻晃动洗涤细胞后吸去 PBS，共洗涤两次；
4.加入 2mL 浓度为 0.05%的胰酶，轻轻晃动，使胰酶溶液均匀覆盖培养瓶底面。显微镜下，当 70-80% 的细胞变圆时轻拍培养瓶，并立即加入 10mL 人间充质干细胞无血清完全培养基进行中和。轻轻 吸取瓶内液体反复冲洗瓶底，使细胞完全脱落；
注意：建议使用浓度为 0.05%的胰酶，并且消化时间不宜过长，以减少胰酶对干细胞的损伤。
5.将细胞悬液转移到 15mL 离心管中，300g 离心 10min；
6.小心去除上清，而后加入 10mL PBS 重悬细胞沉淀，并再次 300g 离心 10min；
7.小心去除上清，加入 2-3mL 人间充质干细胞无血清完全培养基重悬细胞沉淀，按 1：2 或 1：3 的比例接种到新的 T25 瓶中，再次加入足量的完全培养基，轻轻晃动培养瓶，使细胞分布均匀；
8.将细胞置于 37°C，5% CO2 的细胞培养箱中培养。

实验数据