mRNA定制合成服务

君礼生物提供高得率和高性价比的 mRNA 和长链RNA（多个碱基）的定制合成。在微克到毫克的级别上，开展广泛的mRNA修饰服务。mRNA 可从客户提供的 DNA 模板生成；或者我们可以从零开始， 提供完整的mRNA体外合成。我们为所有的标准 mRNA 片段进行 mCAP、ARCA 和 EZ Cap加帽或修饰核苷酸的处理。

有关订购和更多信息，可通过
1：下载我们的客户mRNA定制合成问卷并通过电子邮件发送至 (service@genelily.com‬)；
2：致电联系我们。
我们将很快给您答复并提供报价。

1、mRNA体外转录合成（IVT, in vitro transcription）

为了mRNA能最终有效地在体外翻译， 需要在体外转录合成mRNA时，掺入5’端的m7G加帽结构和3’端的多聚腺苷酸[poly(A)尾]结构。加帽的过程，是通过T7 RNA 聚合酶共转录，在mRNA分子5’端掺入诸如ARCA (Anti-Reverse Cap Analog)。 加尾的过程，是用Poly(A)聚合酶在mRNA分子3’端，加上poly(A)尾， 再用DNase酶消化DNA模板。5-甲基-胞苷(5-Methyl-CTP), 假尿苷(Pseudo/ ψ-UTP)和其他修饰核苷酸也可掺入mRNA, 来降低免疫原性和加强稳定性。合成后的mRNA适用于细胞转染、微注射、体外翻译和RNA疫苗等。

定制合成 的mRNA 拥有广泛的应用：

--用于基因组编辑的mRNA，比如Zinc-finger Nuclease mRNA，TALEN mRNA，Cas9 mRNA和Recombinase mRNA等。

--报告基因的mRNA，比如EGFP mRNA和 Luc mRNA, 用于荧光显微镜、流细胞测量和生物发光成像等。

--重组mRNA, 用于non-integrating generation of iPSC。

2、mRNA纯化:

由T7 RNA聚合酶在体外转录合成的mRNA，可能含有各种污染物：比如未反应完全的小分子底物、反应所需的蛋白酶，以及反应中产生的非特异性产物，如过短或过长或未完全加帽的mRNA等。 某些RNA序列甚至会诱导高水平的免疫原性。君礼生物提供高效的纯化技术，可去除相关污染物，从而提高下游应用的处理效率。

硅胶膜纯化柱（Silica-gel Membrane Spin Column）

它是一种用于快速核酸纯化的固相萃取技术。mRNA可以在特定条件下，结合到硅凝胶膜的固相，并在水中或TE (pH 7)中进行后续洗涤和洗脱步骤。这种方法清除了大多数蛋白质、DNA和NTPs。

HPLC纯化法（ÄKTA avant系统）：

mRNA的纯化，可以通过ÄKTA avant系统，使用alkylated non-porous polystyrene-divinylbenzene copolymer microspheres和优化的缓冲体系，然后进行mRNA分析和mRNA分离。

HPLC 纯化法可以从体外合成和化学修饰后的mRNA 中，去除双链DNA和其他污染物，使 mRNA 具有更高水平的翻译，减少免疫原性或 RNA sensor激活。

我们所有的 mRNA 产品都提供：

-将mCAP/ARCA/EZ Cap掺入到转录合成的mRNA片段中，以提高翻译效率。-通过加入经过修饰的核苷酸（5mCTP, ψUTP）和poly（A）尾，减少宿主细胞免疫反应并增强稳定性。-在合成mRNA过程中，加入DNase酶，降解DNA模板。-用磷酸酶去除RNA末端的5'三磷酸盐(5’ triphosphates)，进一步减少哺乳动物细胞的先天免疫反应。-采用强大的纯化系统，提供高产量的 mRNA来适应大多数下游应用。

产品验证：

【实验服务流程】

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