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1. 小鼠称重,按照50mg/kg腹腔注射麻药,待小鼠肌力下降、对外界刺激反应迟钝后进行后续实验。
2. 将小鼠仰卧位固定在鼠板上,脱毛膏脱掉颈部与左胸部分毛发,鹅颈灯下插气管插管,呼吸机频率控制在90bpm,潮气量在3-4X100 cc/min。
3. 消毒酒精消毒左胸,在第二第三根肋骨间横向剪开皮肤,挑起斜向的胸大肌,拉断内侧纵向的胸小肌,暴露胸腔。切开第二第三肋骨间的肌肉,挑起,放入肋骨撑开器,避免碰到肺,暴露心脏,明显看到胸腺、左心耳。如下图
4. 用尖镊子撕掉心脏包膜,左手固定心脏,暴露心耳,右手持持针器,用8-0的尼龙线在心耳下缘3-5mm LAD处进行结扎,观察左心室结扎处下面的颜色变化以及跳动情况。
5. 用5-0的缝合线缝合肋骨,确保肋骨完全合上,避免形成气胸引起术后死亡。
6. 用5-0的缝合线缝合肌肉和皮肤,完全闭合后用碘酊涂抹伤口。
7.观察小鼠状态,拔出呼吸导管,用镊子刺激小鼠手脚、尾部,刺激小鼠恢复呼吸,10-20s后无呼吸或者无规律呼吸呼吸,继续插上呼吸机,直到能恢复自主呼吸为止。
8. 心梗后一天进行心动超声检测心梗后心功能,保留射血分数在20-40%之间的小鼠。
实例:
我们提供动物模型构建、后续心动超声检测心功能以及后续心态学水平评价等服务,具体欢迎咨询。
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文献和实验-Ehmsen用实时PCR方法和大鼠梗死模型检查移植单核细胞和间充质干细胞的生存情况。接受移植者为雌性大鼠,供者为雄性大鼠。实时PCR检出基于Y染色体的识别。细胞注射入疤痕和心肌梗死的边缘区进行多种比较,包括细胞数(105,106和缺血损伤后的日数),结果反映注射后数小时内干细胞生存率高(35%),但6周后很快降低至极低(±1%)。单核细胞和中膜干细胞的资料相近似。细胞数增加并不改变生存组分,但增加(按逻辑)绝对数。随后较迟的注射,生存情况差。用胎盘-生成生长因子孵育细胞,防止凋亡,对生存率无大作
大鼠神经功能缺损的详细评分(Neurological Severi
)和记忆的保持(memory retention)。该模型含有一定的空间记忆成份,试验箱是一个长方形的封闭空间,高为60cm,箱内有一较小的平台9 cm X 9 cm, 高出底面约2 cm,动物只能不十分舒服地坚持在平台上,如跑下平台(铜棒,通电,30 V)即遭到电击。训练过程是这样的:首先把动物放在平台上,大鼠一般在平台上只能停留几分钟,就会跑下来,但由于底面的金属条是通电的,大鼠在寻找一段时间后,能够找回平台。这时第一次试验结束,24 h后,再次把大鼠放在平台上,这时底面的金属条并不通电,记录
大鼠神经功能缺损的详细评分(Neurological Severity Scores,NSS)标准
1.神经行为评分 在梗死后24 h,按照Masao Shmi izu-Sasamata的方法[3]对所有大鼠进行神经行为评分,评分标准包括:①自主活动的程度,②左前肢偏瘫,③提尾时左前肢伸不直,④抗侧推能力,⑤向左倾斜度,⑥向左环行度,⑦对触须的反应。以上指标无异常为0分,中等异常为1分,严重异常为2分,将各项评分相加,总分为0~14分。 2.动物行为学评定 ①0分:无神经损伤症状; ②1分:不能完全伸展对侧前爪;
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