T7 gRNA SmartNuclease Synthesi

PCR实验操作

-32P]dNTP或DIG-11-dUTP,所增殖的DNA即被32P或DIG所标定，所以PCR是制备核酸探针非常便捷好用的方法。仪器用具：微量离心机；PCR 反应器药品试剂：模版DNA: pBlueGus 质体DNA （~50 pg）核酸引子对： T3 promoter primer 与T7 promoter primer （各2 μM）矿物油 （是否需要视PCR反应器机型而定）PCR DIG probe synthesis kit （Roche）， 内含：Taq DNA polymerase

地高辛（DIG）产品选择指南——选择合适的标记

I采用了显色法，使用显色底物 NBT/BCIP；而Starter Kit II选用化学发光法底物CSPD。   如果您用来合成探针的DNA模板的量比较少或是质量不够高的时候，建议您使用PCR DIG Probe Synthesis Kit。该试剂盒专用于制备高灵敏度的杂交探针，例如单拷贝的基因。其另一个特点就是实验中无需定量斑点检测过程，通过定量凝胶电泳就可以快速确定PCR标记探针的效率。  

待检测样品制备

Kit(Cat.No.900182,10次标记)，通过试剂盒提供的生物素标记的核糖核酸和T7 RNA聚合酶，以体外转录（IVT）的方式扩增并标记cRNA探针。试剂盒提供体外转录和标记的所有试剂，可以作10个反应。标记好的探针经过随机片断化（fragmentation，试剂自行配制）后得到大小约为35-200个碱基大小的RNA片断即可和芯片进行杂交。 2）Affymetrix公司的Genotyping（如人类SNP图谱分析芯片）和健康研究芯片： 这一类芯片用于检测样品基因组的变异，因而只需纯化基因