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- 2025年11月27日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 库存：
100
- 样本：
血清、血浆、组织液等液体样本
- 标记物：
详询
- 适应物种：
猪
- 应用：
科研
- 检测方法：
酶联免疫法
- 检测范围：
详询
- 规格：
48T/96T
| 中文全名 | 猪主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ)检测试剂盒 |
| 英文名称 | Porcine MHC Ⅱ ELISA Kit |
| 详细说明书 | 随货发送 |
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：
（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；
（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；
（3）酶的底物；
（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；
（5）结合物及样本的稀释液；
（6）洗涤液；
（7）酶反应终止液。
ELISA试剂盒样本前处理简介
一）样本前处理的目的、内容、重要性
1、目的
样本处理的最终目的是将待测组分从样本中分离出来，并达到能够检测的状态。
2、内容
提取、净化是主要的两个内容，也有的需要进行浓缩甚至衍生化。
3、重要性
据统计，人们常常将60%的时间花在样品前处理上。这不但不符合高效率的要求，而且烦琐的传统样品处理方法也直接影响到最后的分析结果。
二）残留分析的样品种类
组织（肌肉、肝脏、鱼、虾等）、蜂蜜、蜂王浆、花粉、饲料及其原料、肠衣、熟食、尿样（猪尿、牛尿、羊尿等）、血清（牛血清、猪血清、鸡血清等）、牛奶及奶粉、鸡蛋、粪便等。
三）样本前处理操作一般步骤
1、各种溶液配制
在实验开始前按照说明书的要求配制出各种实验需要的溶液，实验室已有的的溶液也应考虑溶液的配制日期以及有效期
2、样本称量/量取前的处理
有的样本是冷冻保存，有的样本在较低温度时粘度较大在样本且变得不均一，它们称量/量取前必须解冻或加热，夏天采用放置室内解冻即可，冬天可以是防水的温水浴解冻，或24/37度温箱解冻，也可以采用暖气片解冻，但是无论是什么样的方式在解冻完成以后必须立即转到室温环境中来，以免变质，值得一提的是某些药物的实验样本的解冻方式必须使用室温解冻，其他的解冻方式均对结果都有很大的影响
3、样本称量/量取
按照说明书规定的量进行称量/量取，对于外来复核的样本称量/量取应更加的精确，当称量的量很少的情况下可由一般的天平转到分析天平去称量，天平也要按时进行校正部分样本采用量取的方式取样，在量取前必须保证量取容器的准确行；以保证样本量准确
4、样本提取液加入
按照说明书给定的量和试剂/溶液的种类加入到样本中，量少的情况下可以用移液器进行转移，当需要的试剂/溶液量较大的情况下必须用移液管。
注:需要做添加高浓度标准品的样本,在加入提取液之前加入高浓度标准品
5、震/振摇
该步骤有两种方式，一种为长时间的使用震荡器上震荡，该方法可定时定量，但对于某些实验不适用，另一种为较强烈的振荡，可用涡动仪强烈涡动，也可以人为的上下振荡。不同的实验对时间的要求也不同，要按照说明书进行
6、离心
离心有三个影响因素，即为离心力、时间、温度，需要设定的参数就是三个参数，具体的设定方式因离心机不同而有一定的差异，没有条件的情况下要保证时间和离心机转度。
7、取液
１）取上层：这是最为常见和最简单的取液方式，仅仅需要按量取就可以
２）取中间层：最不常见的取液方式，一般情况下是去掉全部上层再吸取中间层，对于一些经验较为丰富的实验员在处理部分实验时可以直接突破上层取中间层
３）取下层：较4是像取中间那样进行，值得注意的是，所有取液方式都有可能遇到取液时液体的量越取越体积越大，甚至吸到移液器内，对于这样的情况在取液时注意看液体的体积达到量就不继续吸就可以了
7、吹干
吹干的三个影响因素为气体、温度、加热方式
气体：较为理想的吹干气体为氮气，出于成本问题多数小规模实验室一般采用空气吹干，
温度：根据药物与提取溶剂的物理性质选择一个合适的温度，一般在50到60℃之间
加热方式：一般有两种方式，分为水浴方式和干浴
8、复溶
吹干以后加入复溶液将药物溶解出来的过程，加速溶解的方式可为涡动溶解和超声溶解，时间时情况而定，一般仅使用涡动溶解
9、样本检测
该步骤的具体操作见试剂盒说明书中的检测步骤。
四）前处理相关试验术语及定义
1、阴性和阳性
阴性：即样本中不含被检测物质。
阳性：样本中含有被检测物质。
2、假阴性与假阳性
假阴性：因某些因素的影响导致阳性样本检测结果为阴性的现象。
假阳性：因某些因素的影响导致阴性样本检测结果为阳性的现象。
3、灵敏度：试剂盒方法能检测到待测药物的最底浓度。
4、准确度：指测定值(平均值)与真值的接近程度，表示分析结果的真实性。通常用添加回收率来表示：
回收率=(测定值-空白值)/添加量 ×100％
5、精密度：指用某种方法重复测定同一均质样品测定值彼此接近程度，表示分析结果的重复性，常用变异系数表示。
6、检测限（LOD limit of detection）：检测限指分析方法能够从样本的背景信号中检测出待测物存在时所需的最低浓度。LOD反映了分析方法整体的灵敏度效能指标。一般对分析方法在LOD水平的定量可信性（如精密度、回收率）不作要求，一般要求残留分析方法LOD≦0.1MRL LOD=B+2SD或B+3SD
7、定量限（LOQ limit of quantitation）：指分析方法能够对样品中的待测物进行定量测定的最低浓度，用于定量方法的验证。
8、残留检测限（ＭＲＬ）
规定允许食品中药物最高残留量，很多情况下各国规定的ＭＲＬ值之间有一定的差异，多数情况下我国规定的ＭＲＬ值较日本、欧盟、美国的高一些。
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文献和实验的胸腺细胞前体（prothymocyte）不足胸腺细胞总数的3%，其表型为CD4-CD8-双阴性细胞（double negative cells），随后发育为CD4+CD8+双阳性细胞（double positive cells），并受到严格的选择。假如一个双阳性细胞表面能与胸腺皮质上皮细胞表面MHc I类或Ⅱ类分子发生有效结合，就可能被选择而继续发育，否则会发生程序性的细胞死亡（programmed cell death）。MHC I类分子选择CD8复合受体（coreceptor），而使同一
0.4、1 .0和5.0 μg/kg的AOZ，同一份样品分别用本ELISA方法和德国试剂盒测定，结果见表3。本方法回收率（61.0％～92.5％）接近德国试剂盒（75.2％～127.5％）水平，均属于正常波动范围。但ELISA方法在高浓度回收率（61.0％）低于德国试剂盒水平（76.4％），其原因可能是本方法的样品提取效率低于德国试剂盒样品提取效率，因此有必要对本方法样品提取程序作进一步的探索。 图4 空白猪肝脏（A）和肝脏样品（B）色谱图（略） Fig.4 Chromatograms
比拟的高通量、省时和高效率，如ELISA 3 h仅能检测10个标本，而液相芯片可做94个标本，非常适用于临床。 目前市场上用于组织配型的商品化体外诊断试剂盒有One Lambda 公司的LABScreen、Orchid Diagnostics公司的LifeMatch ID ClassⅠ/Ⅱ试剂盒、Tepnel Lifecodes公司的Lifecodes ClassⅠ/Ⅱ ID等，其原理是在微球上交联各种纯化抗原，检测人血清中的HLA Ⅰ类和Ⅱ类抗体。有研究认为液相芯片法检测抗体的灵敏度优于
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