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Phi29 DNA Polym
企业认证
Phi29 DNA Polymerase(with dNTP)
125U
目录号:E013-01A
产品描述:
本酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶,利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有特殊的链置换活性和高效的连续合成特性,对模板有很强的结合能力,可连续合成多达70kb的DNA片段而不从模板上解离。同时该酶具有很强3´→5´外切酶校正功能,保真性比Taq DNA聚合酶高100倍。
产品特点:
极高的掺入率;
超强的链置换能力;
保真性高;
中温下反应。
产品用途:
1)恒温protein-primed DNA扩增;
2)利用随机引物扩增DNA;
3)滚环复制;
4)复制extended-region。
使用建议:
该酶缓冲液中含有还原剂DTT以便保证其最大酶活。故如果缓冲液不新鲜或经过反复冻融,使用前应添加4mM的DTT。
要求更高扩增效率的反应,请选择Novoprotein改造的升级版Super Phi29 DNA 聚合酶(Cat. No: E012)。
保存温度:
-20℃。
应用实例:
测序质粒模板的制备
优点:无需细菌培养、收集、裂解和质粒DNA的分离与纯化,不需要离心机和PCR仪。
1)样品处理:在平板上挑取单克隆到10μl无菌水中, 取1μl进行反应。
2)样品预变性与质粒扩增:按照反应体系,先进行预变性,并使引物与质粒进行退火,加入其它成分后30℃扩增过夜。如选用Super Phi29 DNA 聚合酶(Cat. No: E012)反应时间可缩短至1小时。
3)扩增效果检测(可选):将扩增产物稀释后进行琼脂糖凝胶电泳,如存在合适的酶切位点,可进行酶切反应检测。
3)热失活:65℃,10分钟。
4)测序反应:取上述反应液2μl加8μl无菌水,即可用于直接测序。
For research use only.
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