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Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2)
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有效期9个月
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
-20℃保存
100T
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
促销价(元) |
Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) |
13775ES60 |
100 T |
3565.00 |
1100.00 |
13775ES80 |
1000 T |
28515.00 |
9800.00 |
|
13775ES92 |
10000 T |
228115.00 |
78400.00 |
产品描述
Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) 是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。独特的Buffer和酶的设计,可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系的配制和产品设计。
本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干Buffer,Enzymes Mix等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够在保证引物扩增效率的同时,进行多重荧光定量扩增反应。
本试剂盒酶mix中匹配冻干保护剂,可以直接用于冻干。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
||
13775ES60 (100 T) |
13775ES80 (1000 T) |
13775ES92 (10000 T) |
||
13775-A |
4×Hifair® V Lyo-Buffer |
600 μL |
6 mL |
60 mL |
13775-B |
MgCl2 (25 mM) |
500 μL |
5 mL |
50 mL |
13775-C |
10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
240 μL |
2.4 mL |
24 mL |
【注】:1) 4×Hifair® V Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。
2) 10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
适用机型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™,ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex,Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™,Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™,Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000,Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96,Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存,有效期9个月。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
实验过程中请使用RNase free耗材。
为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
反应体系(以25 μL为例)
组分 |
体积(μL) |
终浓度 |
4×Hifair® V Lyo-Buffer |
6 |
1× |
10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
2.4 |
- |
MgCl2 (25 mM) |
3 |
|
Primer Mix (10 μM) |
各0.4 |
0.16 μM |
Probe Mix (10 μM) |
各0.2 |
0.08 μM |
模板 RNA |
1-5 |
- |
RNase Free H2O |
to 25 |
- |
【注】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。
b) 探针浓度:Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。
d) 反应体系:推荐使用25 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
标准扩增程序
反应阶段 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
1 |
逆转录 |
50°Ca |
10 min |
1 |
2 |
预变性 |
95°C |
5 min |
1 |
3 |
扩增反应 |
95°C |
15 sec |
45 |
60°Cb |
30 secc |
【注】:
a) 逆转录:42°C或者50°C均可,时间 10-15 min。
b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物,退火温度建议≥60°C。
c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。
本试剂可以直接用于冻干,也可以进一步在此基础上针对不同引物,进一步摸索辅料,本试剂的标准冻干程序如下:
温度 |
斜率时间 |
时间 |
真空 mbar |
备注 |
||
预冻 |
1 |
-45°C |
—— |
4 h |
—— |
常温最快速率降温 |
2 |
-45°C |
—— |
—— |
保持,根据包材验证保持时间 |
||
真空 |
3 |
-45°C |
—— |
0.01 |
||
升华阶段 |
4 |
-40°C |
1 h |
10 h |
0.01 |
无斜率控制型冻干机,可分6个阶段升温 |
5 |
0°C |
1 h |
10 h |
0.01 |
||
6 |
0.01 |
无斜率控制型冻干机,可分6个阶段升温 |
||||
解析干燥 |
7 |
25°C |
1 h |
4 h |
0 |
|
含水量控制 |
8 |
压升测试重试时间:30 min |
压升测试:2 min<5 Pa |
|||
制品保存温度 |
9 |
0°C |
1 |
X |
0 |
注意事项:
1. 辅料配方发生微量的变化,需重新测定冻干参数,并做相应调整。
2. 冻干设备要求:
冷阱盘管表面温度≤ -60°C
板层温度≤-45°C,温度均一性±1°C
可做压升测试(冻干生产前,做泄漏率测试)
3. 环境要求:
溶液分装及配置尽量在万级层流保护下进行,环境空间尘埃掉落进溶液中成为冻干过程的晶核,影响溶液的结晶的过冷度,导致产品质量不一致性。
4. 真空控制
掺气方式:建议掺入气体为高纯氮气
5. 冻干试剂MIX工艺参数设定参考(冻干设备升华效率≥1 mm/小时)。
相关产品推荐
产品名称 |
货号 |
规格 |
价格(元) |
10×Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) |
13168ES60 |
100 T |
询价 |
13168ES80 |
1000 T |
询价 |
|
13168ES92 |
10000 T |
询价 |
|
冻干保护剂V2 |
13743ES60 |
100 T |
195.00 |
13743ES80 |
1000 T |
1655.00 |
|
13743ES92 |
10000 T |
13555.00 |
|
13743ES98 |
100000 T |
95885.00 |
HB220113
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