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口蹄疫亚Ⅰ型抗体检测试剂盒(酶
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Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Asia Ⅰ(ELISA)
/
1年
优利科(上海)生命科学有限公司
2-8℃
96T
口蹄疫亚Ⅰ型抗体检测试剂盒(酶联免疫法)【产品名称】通用名:口蹄疫亚Ⅰ型抗体检测试剂盒(酶联免疫法)英文名:Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Asia Ⅰ(ELISA)【包装规格】 96T×1/盒(注:酶标板不可拆)、96T×2/盒(注:酶标板一块可拆、一块不可拆)、96T×5/盒(注:酶标板二块可拆、三块不可拆)【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病,其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫亚Ⅰ型抗体,可用于口蹄疫亚Ⅰ型疫苗免疫效果评价。【原 理】 本试剂盒由预包被口蹄疫亚Ⅰ型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液酶标记物及其他配套试剂组成,应用阻断酶联免疫法(ELISA)原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫亚Ⅰ型抗体。实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育,样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原,阻断抗原与板的结合;经洗涤后,再加抗体工作液孵育;经洗涤后加入酶标记物孵育;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加底物液,与酶标结合物反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有口蹄疫亚Ⅰ型抗体。【试剂盒组成】
序号
名称
规格/96T×1
规格/96T×2
规格/96T×5
1
酶标记物
6ml×1(红盖)
11ml×1(红盖)
26ml×1(红盖)
2
抗体工作液
6ml×1(蓝盖)
11ml×1(蓝盖)
26ml×1(蓝盖)
3
抗原液
6ml×1(黑盖)
11ml×1(黑盖)
26ml×1(黑盖)
4
20X浓缩洗涤液
40ml×1(白盖)
40ml×2(白盖)
200ml×1(白盖)
5
底物液A
6ml×1(白盖)
11ml×1(白盖)
26ml×1(白盖)
6
底物液B
11ml×1(棕盖)
7
终止液
6ml×1(黄盖)
11ml×1(黄盖)
26ml×1(黄盖)
8
阳性对照
1.0 ml×1(红盖)
1.5 ml×1(红盖)
2.0 ml×1(红盖)
9
阴性对照
1.0 ml×1(绿盖)
1.5 ml×1(绿盖)
2.0 ml×1(绿盖)
10
酶标板
96T×1
96T×2
96T×5
11
盖板膜
12
自封袋
13
说明书
14
稀释板
【储存及有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。【样品准备】1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。2.用工作洗涤液将待检牛、羊、猪血清先按32倍稀释(如5μl血清加入155μl工作洗涤液中,混匀),阴、阳性对照不用稀释。3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。【检验方法】1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl,样品孔每孔先加入工作洗涤液25ul,再加入稀释后的样品25μl;最后都加入抗原液50μl。 注:加入抗原后样本稀释比例相当于1:128。4.震荡混匀10秒,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应30分钟。5.甩去孔内液体,每孔加350 ul工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。6.每孔加抗体工作液50μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。7.洗涤,同步骤5。8.每孔加酶标记物50μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。9.洗涤,同步骤5。10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃避光反应15分钟。11.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照A值≥0.8,阳性对照A值≤50%×阴性对照A值。【检验结果的解释】1.PI(阻断率)=(1-样本A值/阴性对照孔平均A值)×100%,PI≥50%为阳性;PI<50%为阴性。2.本实验检测结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫亚Ⅰ型抗体,且效价高于1:128,达到保护水平。3.本实验检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫亚Ⅰ型抗体,或效价低于1:128,未达到充足保护水平。4.如需了解样本抗体的最终效价,可将样本进行梯度稀释,使PI≥50%的最高稀释比例即为该样本抗体的最终效价。【试验方法的局限性】 该试验仅作为定性牛、羊、猪血清中口蹄疫亚Ⅰ型抗体,根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。【注意事项】1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以完全溶解。5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。6.用于检测的样品应保持新鲜。7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。8.不同批号试剂组分不得混用。
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859 人阅读发布时间:2022-03-16 17:44
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