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文献和实验[Steps 1-22] or SSCP [Steps 23-37] only) Imaging equipment for agarose gels, and computer software for analyzing band intensities (for duplex PCR only; see Steps 40-53) Microcentrifuge tubes (1.5 ml) PCR tubes (0.2-ml thin-walled) PhosphorImager
6. Incubate the tubes at 42°C for 50 min, heat inactivate at 70°C for 15 min, and then chill on ice. 7. Add 1 ml RNase H and incubate at 37°C for 20 min. 8. Store the 1st strand cDNA at -20°C until use for real-time PCR. Real-time PCR
措施比较严密,则考虑可能为环境污染。 环境污染中常见的污染源主要有: 1、模板提取时真空抽干装置; 2、凝胶电泳加样器; 3、电泳装置; 4、紫外分析仪; 5、切胶用刀或手术刀片; 6、离心机; 7、冰箱门把手,冷冻架,门把手或实验台面等;此时可用擦拭实验来查找可疑污染源。1)用无菌水浸泡过的灭菌棉签擦拭可疑污染源;2)0.1ml去离子水浸泡;3)取5ml做PCR实验;4)电泳检测结果。 8、气溶胶。如果经过上述追踪实验,仍不能查找到确切污染源,则污染可能是由空气中PCR产物的气溶胶
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