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文献和实验1.PCR技术PolymeraseChainReaction聚合酶链反应它是一种模拟天然DNA复制过程,在有DNA模板、DNA聚合酶(Taq酶)、RNA引物和四种dNTP的情况下,通过高温变性(90℃-95℃,1-2min),低温退火(25℃-37℃,1-2min),中温延伸(60℃-75℃,90sec-5min),这样反复循环的过程中,在体外扩增特异性DNA片段的分子生物学技术。1)、PCR反应成分: TaqDNA聚合酶引物浓度:一般0.1-0.5μmol/LdNTP:一般为50-200μ
,待脱凝固后,取出梳子,加入适量电极缓冲液使板胶浸没在缓冲液下1mm处。 ⑶样品制备与加样:溶解于TBE或THE内的样品应含指示染料(0.025%溴酚蓝或桔黄橙)、蔗糖(10%~15%)或甘油(5%~10%),也可使用2.5%Fico Ⅱ增加比重,使样品集中,每齿孔可加样5~10μg。 ⑷电泳:一般电压为5~15V/cm。对大分子的分离可用电压5V/cm。电泳过程最好在低温条件下进行。 ⑸样品回收:电泳结束后在紫外灯下观察样品的分离情况,对需要的DNA分子或特殊片段可从电泳后的凝胶中以不同
电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。电泳技术的基本原理和分类在电场中,推动带电质点运动的力(F)等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积。F=QE质点的前移同样要受到阻力(F)的影响,对于一个球形质点,服从Stoke定律,即:F′=6πrην式中r为质点半径,η为介质粘度
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