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文献和实验. 真空离心干燥 3~5 分钟,或放在室温下使乙醇完全挥发掉。 12. 沉淀用30 μl DEPC-H2O溶解。如发现沉淀难溶,68 ℃处理 10 min。 13. RNA检测 (1)测定样品在260 nm和280 nm的吸光值 按1OD=40 μg/ ml RNA计算RNA的产量。OD260/OD280在1.8-2.0 。 (2)进行甲醛变性琼脂糖凝胶电泳确定RNA的完整性和污染情况。 低得率:A.样品裂解或匀浆处理不彻底;B.最后得到的 RNA 沉淀未完全溶解。
液裂解细胞,用移液器适当吹打使细胞脱落,大瓶贴壁细胞可以先用胰酶洗脱下来后再裂解,裂解方法仿照悬浮细胞处理。 B、 悬浮细胞的处理:先将悬浮细胞置于 EP 管中 3000 rpm 离心 5 min 去掉上清培养基,每 20 μL 体系细胞加 100 μL 裂解液反复吹打至细胞完全破碎。 处理好的样品 12000 rpm 离心 5 min,取上清即为提取的蛋白。置于 4 ℃ 可保存一周,-20℃ 可保存约 2 个月,-80 ℃ 可保存半年。 蛋白浓度的测定:酶标板,酶标仪、离心机、1 mg/mL
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