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文献和实验物污染。（3）细胞浓度控制在：1×107－5×107/ml。（4）使用高浓度血清或蛋白保护剂。一般情况下，用于冷冻保存完全细胞生长培养液中血 清浓度大于 20％。（5）使用合适的细胞冷冻保护剂，以保护细胞在冷冻过程中免受冰晶破坏。目前，最常用 的冷冻保护剂是 DMSO(二甲基亚砜)，使用终浓度为 5－10％。但是，有些细胞系不能用 DMSO 作为冷冻保护剂，如人白血病细胞系 HL-60。因为，DMSO 能诱导 HL-60 细胞分化。在这种情 况下，可选用其它冷冻保护剂，如甘油（glycele）, 羟乙
等级， 必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)， 其本身即为无菌状况， 第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于4 °C， 避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质， 并可减少污染之机会。若要过滤DMSO， 则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。 49、冷冻保存细胞之方法？ 冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜
) ---> 液氮槽vapor phase 长期储存。 1.6.2. 程序降温：利用等速降温机以–1 ～ -3℃/分钟之速度由室温降至–120℃，放在液氮槽vapor phase 长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma 之保存。 基础篇-细胞冷冻保存 （二） 2. 材料： 2.1. 生长良好之培养细胞 2.2. 新鲜培养基 2.3. DMSO (Sigma D-2650) 2.4. 无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020) 2.5. 0.4 ％ w/v
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