即用型2×高保真酶预混液(含染

料)

价格 ￥105
品牌 Yeasen翌圣
货号 10154ES01
产地上海
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数量：
大量
英文名：
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)
保质期：
有效期1年
供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
保存条件：
-20℃保存
规格：
100 μL

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye) 高保真酶预混液	10154ES01	100 μL	105.00
	10154ES03	1 mL	585.00
	10154ES08	5×1 mL	1,655.00

产品描述

2×Hieff Canace^® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×预混合溶液，包含Hieff Canace^® Plus High-Fidelity DNA Polymerase，dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb，该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。
2×Hieff Canace^® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。本产品中含有电泳指示染料，PCR产物可直接进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

运输与保存方法

冰袋运输。-20°C保存。有效期1年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

推荐PCR反应体系

组分	体积	终浓度
ddH2O	to 50 μL	-
DNA模板	适量	-
Primer正向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
Primer反向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)	25 μL	1×

【注】：1）聚合酶终浓度：在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。

2）引物：PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.4 μM。

3）Mg2+、dNTPs终浓度：在1×预混液含有2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。

4）不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）：

模板种类	扩增片段1 kb-10 kb
基因组DNA	50 ng-200 ng
质粒或病毒DNA	10 pg-20 ng
cDNA	1-2.5 μL（不超过PCR反应总体积的1/10）

PCR扩增程序

有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。

两步法程序（优先推荐）： 三步法程序（常规程序）：

循环步骤	温度	时间	循环数	循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98°C	3 min	1	预变性a	98°C	3 min	1
变性	98°C	10 sec	30-35	变性	98°C	10 sec	30-35
延伸	68°C	30 sec/kb	30-35	退火b	60°C	20 sec
终延伸	72°C	5 min	1	延伸c	72°C	30 sec/kb
				终延伸	72°C	5 min	1

梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）: *不同扩增程序下的特点：

步骤	温度	时间	循环数	程序类型	两步法	三步法	梯度退火
预变性	98°C	3 min	1	速度	最快	中等	慢
变性	98°C	10 sec	15，每个循环降低1℃	特异性	高	中等	高
梯度退火	70-55°C	20 sec		PCR产量	中等	最高	中等
延伸	72°C	30 sec/kb		检出率	高	中等	高
变性	98°C	10 sec	20
正常退火	55°C	20 sec
延伸	72°C	30 sec/kb
终延伸	72°C	5 min	1

【注】：

a. 预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
b. 退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

c. 延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。

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