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产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye) 高保真酶预混液 | 10154ES01 | 100 μL | 105.00 |
10154ES03 | 1 mL | 585.00 | |
10154ES08 | 5×1 mL | 1,655.00 |
产品描述
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×预混合溶液,包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体,可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增目的片段的长度可长达13 kb,该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍,是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。适用于复杂模板的扩增,扩增产物为平末端。
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可,并可以通过两步法的程序进行扩增,简化了实验步骤,节省了时间。本产品中含有电泳指示染料,PCR产物可直接进行电泳。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
产品应用
基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存。有效期1年。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2)本产品仅作科研用途!
推荐PCR反应体系
组分 | 体积 | 终浓度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
DNA模板 | 适量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye) | 25 μL | 1× |
【注】:1)聚合酶终浓度:在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2)引物:PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM,推荐0.4 μM。
3)Mg2+、dNTPs终浓度:在1×预混液含有2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
4)不同模板的推荐使用量(25 μL反应体系):
模板种类 | 扩增片段1 kb-10 kb |
基因组DNA | 50 ng-200 ng |
质粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-2.5 μL(不超过PCR反应总体积的1/10) |
PCR扩增程序
有以下三种程序可选择,优先选择两步法程序。
两步法程序(优先推荐): 三步法程序(常规程序):
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
预变性 | 98°C | 3 min | 1 | 预变性a | 98°C | 3 min | 1 | |
变性 | 98°C | 10 sec | 30-35 | 变性 | 98°C | 10 sec | 30-35 | |
延伸 | 68°C | 30 sec/kb | 退火b | 60°C | 20 sec | |||
终延伸 | 72°C | 5 min | 1 | 延伸c | 72°C | 30 sec/kb | ||
终延伸 | 72°C | 5 min | 1 |
梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序): *不同扩增程序下的特点:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 程序类型 | 两步法 | 三步法 | 梯度退火 | |
预变性 | 98°C | 3 min | 1 | 速度 | 最快 | 中等 | 慢 | |
变性 | 98°C | 10 sec | 15,每个循环降低1℃ | 特异性 | 高 | 中等 | 高 | |
梯度退火 | 70-55°C | 20 sec | PCR产量 | 中等 | 最高 | 中等 | ||
延伸 | 72°C | 30 sec/kb | 检出率 | 高 | 中等 | 高 | ||
变性 | 98°C | 10 sec | 20 | |||||
正常退火 | 55°C | 20 sec | ||||||
延伸 | 72°C | 30 sec/kb | ||||||
终延伸 | 72°C | 5 min | 1 |
【注】:
a. 预变性温度和时间:推荐温度:98°C,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min。
b. 退火温度和时间:推荐温度:60°C,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
c. 延伸温度和时间:推荐温度:72°C。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
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产品名称 | 货号 | 规格 |
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10148ES60/76/80 | 100 U/500 U/1000 U | |
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HB211222
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2023.03.21-2023.06.30
2023.03.21-2023.06.30
2023.03.08-2023.04.30
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