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大量
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)
有效期1年
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
-20℃保存
100 μL
产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格(元)
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye) 高保真酶预混液
10154ES01
105.00
10154ES03
1 mL
585.00
10154ES08
5×1 mL
1,655.00
产品描述
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×预混合溶液,包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体,可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增目的片段的长度可长达13 kb,该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍,是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。适用于复杂模板的扩增,扩增产物为平末端。2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可,并可以通过两步法的程序进行扩增,简化了实验步骤,节省了时间。本产品中含有电泳指示染料,PCR产物可直接进行电泳。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
产品应用
基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存。有效期1年。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2)本产品仅作科研用途!
推荐PCR反应体系
组分
体积
终浓度
ddH2O
to 50 μL
-
DNA模板
适量
Primer正向 (10 μM)
2 μL
0.4 μM
Primer反向 (10 μM)
25 μL
1×
【注】:1)聚合酶终浓度:在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2)引物:PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM,推荐0.4 μM。
3)Mg2+、dNTPs终浓度:在1×预混液含有2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
4)不同模板的推荐使用量(25 μL反应体系):
模板种类
扩增片段1 kb-10 kb
基因组DNA
50 ng-200 ng
质粒或病毒DNA
10 pg-20 ng
cDNA
1-2.5 μL(不超过PCR反应总体积的1/10)
PCR扩增程序
有以下三种程序可选择,优先选择两步法程序。
两步法程序(优先推荐): 三步法程序(常规程序):
循环步骤
温度
时间
循环数
预变性
98°C
3 min
1
预变性a
变性
10 sec
30-35
延伸
68°C
30 sec/kb
退火b
60°C
20 sec
终延伸
72°C
5 min
延伸c
梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序): *不同扩增程序下的特点:
步骤
程序类型
两步法
三步法
梯度退火
速度
最快
中等
慢
15,每个循环降低1℃
特异性
高
70-55°C
PCR产量
最高
检出率
20
正常退火
55°C
【注】:
a. 预变性温度和时间:推荐温度:98°C,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min。 b. 退火温度和时间:推荐温度:60°C,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
c. 延伸温度和时间:推荐温度:72°C。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
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