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- 智立中特
- 20211259101118801
- 武汉
- 2025年08月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 细胞类型：
细胞系
- 供应商：
智立中特（武汉）生物科技有限公司
- 库存：
100
- 英文名：
B95-8
- 生长状态：
悬浮细胞
- 运输方式：
顺丰派送
- 器官来源：
绒猴
- 细胞形态：
淋巴母细胞样
- 物种来源：
绒猴
- 组织来源：
外周血淋巴细胞
- 规格：
1×10⁶cells/T25培养瓶
名称 B95-8(绒猴EB病毒转化的白细胞)
别称 B95.8;B95.8;B95-8;B-95-8;B958;GM07404;GM07404D
种属 绒猴
年龄（性别） 不详
组织来源 外周血淋巴细胞
生长特性 悬浮细胞
细胞形态 淋巴母细胞样
背景描述 B95-8细胞源自暴露于人白血球中抽提的EB病毒的绒猴白血球；B95-8细胞是一个连续株，并能释放高滴度的转染EB病毒。B95-8细胞提供EB病毒用于建立人的连续淋巴细胞株。
生物安全等级 2
生长培养基 RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S
推荐传代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL
推荐换液频率 2~3次/周
倍增时间 ~40小时
冻存条件
冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
注意事项 该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集细胞悬液；请勿直接倒掉细胞培养液。
保藏机构 DSMZ;ACC-100ECACC;85011419
质粒菌株产品操作说明书
扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必先转化提质粒后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μlddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，保质期90天，请务必先转化提质粒后使用）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
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文献和实验Epstein-Barr Virus: The B95-8 Strain Map
This chapter summarizes the genes and mRNAs that have been mapped on to the B95-8 EBV genome. The complete sequence of this strain of Epstein-Barr Virus (EBV) was established (1 ,2 ) and data from many publications has been integrated
-8 EBV转化的绒猴白细胞 CP-88 草鱼胚胎细胞 NISE-Sacy-12 蓖麻蚕卵细胞 ZC-7901 草鱼吻端细胞 RF/6A 猴脉络膜-视网膜细胞(内皮) Mv1Lu 貂肺上皮细胞 二、肿瘤细胞 1.小鼠类 EL4 淋巴瘤 Pcc4 胚癌细胞 EL4IL-2 淋巴瘤 P815 肥大细胞瘤 YAC-1 淋巴瘤 MFC 前胃癌 L1210 淋巴白血病 AtT20 垂体瘤 P388D1 淋巴样瘤 NS
养基（+0.5%pHA）加入已经洗涤三次的白细胞离心管中，轻轻吹打均匀，转入24孔板中，加入自备EBV液0.6mL，20ug/ mL环孢霉素0.2 mL，放入37℃5%CO2培养箱中培养。3-4天后观察细胞，镜下可见集合的细胞团，以及已被转化的明显增大的类淋母细胞，4-5天后可加入0.5 mL全培养基（1640+15%FBS+1%双抗+1.6%1M Hepes），然后视细胞生长情况更换培养基，并且转入培养瓶中。附：EBV液制备：培养B95-8细胞，待细胞长满，培养基变黄，收集于50mL离心管中，于-80℃冰箱中
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