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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2-8℃,有效期3个月
- 库存:
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- 供应商:
北京索莱宝科技有限公司
- 规格:
500ml
蔗糖-PFA溶液(5%)
货号:G2130
规格:500 mL
保存:4℃保存,有效期3个月。
产品内容:
固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦wei酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
PFA-蔗糖溶液(5%)由4%PFA、磷酸盐、5%蔗糖组成,pH为7.4,该固定液适合于特殊要求的细胞或组织的固定,亦可作为特殊样本的脱水剂。
操作步骤(仅供参考):
- 按实验具体要求操作。
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- PFA溶液有一定刺激性和腐蚀性,请在通风环境下小心操作。
- 一经开启,尽快用完,储存过久的液体固定效果易下降。
- 避免过度延长固定时间,否则易引起细胞内生物大分子过度交联。
- 组织取材的厚度不同,固定时间也不同。
- 固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
- 温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
- 取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
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文献和实验蔗糖水溶液的密度 g/mL ( 摘自 P.Honig: "Principles of Sugar Technology" Vol.I, p31 ) 克蔗糖/100克溶液 0℃ 10℃ 15℃ 20℃ 25℃ 30℃ 40℃ 50℃ 60℃ 0 0.99987 0.99973 0.99913 0.99823 0.99707 0.99567 0.99232 0.98813 0.98330 5 1.02033 1.01960 1.01884 1.01785 1.01661
1.FSC = 细胞体积大小 FSC(Forward Scatter,前向散射光),细胞散射光涉及光的折射、反射和衍射,是一个光学测量值。对FSC 影响最大的是细胞内部和外部折射率之间的差异,所以 FSC 可以辅助判断细胞的大小。但是细胞核质比、细胞颗粒的数量和类型以及细胞表面形状等因素也会影响细胞散射光。因此,不要总是认为较大的 FSC 一定等于较大的细胞体积。 2.细胞固定用的是 1% 多聚甲醛(PFA) 多聚甲醛(PFA)是不溶于水的白色粉末,而在使用前我们需要将其配置成溶液:通过加热
。PBS 灌流结束标志以肝脏变白和流出澄清液体为准,PFA 灌流成功标志位肝脏变硬为准,灌得好的大鼠四肢会抽搐几次,成年 SD 大鼠 250 ml PBS 和 250 ml PFA 足矣。现今灌流多为 PFA,没有争议,但有人提出将 PBS 和 PFA 4 ℃ 预冷再进行灌注效果更好,我没有试过,但我觉得室温亦可。也有人做免疫组化不需要灌流,但那都是小组织,一般情况,灌一定是比不灌固定效果要好的。脱水10%,20%,30% 蔗糖的 PBS 溶液梯度脱水。脱水这一步直接关系到后面切片的冰晶的形成,脱水脱
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