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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Mycoplasma hominis PCR Kit
- 保质期:
1年
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T
产品及特点
支原体(mycoplasma)是 1898 年Nocard 等发现的一种类似细菌但不具有胞壁的原核微生物,能在无生命的人工培养基上生长繁殖,直径 50-300nm,能通过细菌滤器。又称霉形体,为目前发现的最小的最简单的原核生物,支原 体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体(支原体是原核细胞,原核细胞的细胞器只有核糖体)。基因组多为双链 DNA,散布于整个细胞内没有形成的核区或拟核。与泌尿生殖道感染有关的主要是分解尿素支原体和人型支原体两种,约有20-30%的非淋菌性尿道炎的病人,是由以上两种支原体引起的,是非淋菌性尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌。因此对支原体进行快速灵敏的诊断具有重要 的意义。
本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的产品,它具有下列特点:
- 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。
- 引物经过精心优化,专一性强,只扩增支原体 DNA,但跟其他微生物无交叉反应。
- 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
- PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
- 本试剂盒足够做 40μL 体系的PCR 50 次。
- 本产品只能用于科研。
| 成 份 | 包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 1 mL(红盖) |
| 超纯水 | 1 mL(亮黄盖) |
| 支原体PCR 引物混合液 | 100 μL(白盖) |
| 支原体PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL(黄盖) |
| 核酸释放剂(试用装) | 20 次(1mL、绿盖) |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其
他试剂。
自备试剂
样品 DNA。

使用方法
一、样品DNA 的制备
1. 如果有N 个样品,必须设置N+2 个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL 阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作
为PC。另外用水作为 NC。
- 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的 DNAout 或柱式 DNAout。本试剂盒免费赠送20 次免 DNA 提取的核酸释放剂,本产品的裂解液可以直接作为PCR 模板,省略了 DNA 提取步骤。其使用手册可向本公司客服索取。
二、设置PCR 反应(40 μL 体系)
3.对 N+2 个样品,在PCR 时需要增加一个PCR 阳性对照和一个PCR 阴性对照,故需要设置N+4 个反应。

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文献和实验buffer,摸索镁离子浓度或适当加入 DMSO(小于 0.3%) · 提高退火温度,增加延伸时间(反应条件参照试剂盒说明书) 问题 2:假阳性 现象:空白对照出现条带 可能原因: · 引物设计不适,与目的序列具有同源性 · 试剂污染:水、移液枪等被核酸污染 · 样品间出现交叉污染 解决方法: · 实验仪器高压灭菌 · 实验试剂(酶除外)高压灭菌,离心管枪头一次性使用 · 规范实验操作 · 假阳性可通过巢式 PCR 解决,或者使用特异性较高的试剂盒扩增 问题 3:拖尾、弥散 现象:电泳出现拖尾、涂抹
PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
酶。 图 1.非特异性扩增(左图)与使用热启动 DNA 聚合酶进行的特异性扩增(右图)。 如何为您的 DNA 聚合酶选择正确的形式 还有更多需要考虑的因素。选择可以简化您工作流程的聚合酶形式。PCR 聚合酶形式的选择包括即用型预混液、用于直接凝胶上样的含染料缓冲液以及用于直接 PCR 分析的所有必要成分的完整试剂盒。 使用预混液,您只需添加模板和引物,然后,开始 PCR 实验。如果您想进一步减少操作步骤,使用含染料缓冲液的聚合酶允许 PCR 产物直接凝胶上样(注意:确保染料与下游应用兼容)。直接
过的 DNA 聚合酶增强了与模板的亲和度,其灵敏度更高,因而所需的模板量少。过低的模板量会减少 PCR 的产量,过高的模板量可能造成非特异性扩增,所以 DNA 模板量的优化尤为重要。 除了 gDNA、cDNA 和质粒 DNA,PCR 产物也可作为模板以获得更高的产量。但 PCR 产物中存在的残余反应组分(如引物、dNTP、盐和副产物)可能会影响下一次的 PCR 反应。所以推荐在下一次 PCR 前使用 PCR 产物纯化试剂盒将 PCR 产物先进行纯化。 【DNA 聚合酶】 DNA 聚合酶是PCR扩增中最关键
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