- ￥1896
- 博尔森生物
- BES2138PCR
- 中国/上海
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
999
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
48T 非一管式
铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
产品说明致病菌检测系列可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于铜绿假单胞菌的检测。检出限为 10³ CFU/ml。
产品组成（48 测试）
适用仪器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene 9600 等实时荧光 PCR 仪。
自备耗材和仪器
①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管；②灭菌 0.2mL PCR 管或八联管；③冰盒；④移液器（0.5-10μL，10-100μL，
100-1000μL）及配套灭菌吸头；⑤离心机；⑥涡旋混匀器；⑦金属浴
注意事项
1. 本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1） 第一区：试剂准备区。
2） 第二区：样本制备区。
3） 第三区：扩增及产物分析区。
分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3. 严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4. 反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5. 反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6. 不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
7. 检出限为 10³ CFU/ml是以 1 ml 10³ CFU/ml增菌液离心后收集菌体再提取的细菌基因组 DNA作为模板。
样品处理
参照《SN/T2099-2008 进出口食品中绿脓杆菌检测方法》中的 7.1 和 7.2 处理样品，对样品进行前增菌，制备的
菌液保存待用。
如为冷冻样品，应于 2~5℃解冻，且不超过 18h，若不能及时检验，应置于小于-15℃保存，非冷冻的易腐样品
应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于 4℃冰箱保存，并在 24h 内检验。
按无菌操作取检样 25 g（ml）样品至 225 ml SCDLP 增菌液中，充分摇匀，于 36 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h。
详细步骤请按照标准操作。
实验操作
将试剂完全解冻，各组分离心 30s。
1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：
若有 N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个空白对照 NG+1 个
阳性对照 PG），涡旋混匀，离心 30 秒，分装于 0.2ml PCR 管中。
2.模板制备（样本制备区）
建议使用病原微生物 DNA/RNA 提取试剂盒等商品化试剂盒，具体过程详见产品说明书。
3．添加模板（样本制备区，放置于冰盒中进行）
向步骤 1 中已含有混合液的 PCR 管中分别加入 5μl 模板，顺序为空白对照 NG-P、待测样品模板、阳性对照PG-PA-P，离心 30 秒，立即进行扩增反应。
4. 扩增反应（扩增及产物分析区）
使用荧光定量 PCR 仪，荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 NONE。
按下列条件设置扩增反应：
结果判定
检测样品无 Ct 值或≥40，曲线为直线或轻微斜线，无“S”型扩增曲线，可报告样品阴性，不含有铜绿假单胞
菌或含量低于检测限；
检测样品 Ct≤36，曲线呈“S”型扩增曲线，可直接报告样品阳性，含有铜绿假单胞菌；
检测样品 36＜Ct＜40，需进行一次重复实验，若 Ct 值≥40 则为阴性，不含有铜绿假单胞菌或含量低于检测
限；否则为阳性，含有铜绿假单胞菌。
NG 反应管结果显示“阴性”，PG 反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。
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铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
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