- ￥3866
- 博尔森生物
- BES2132PCR
- 中国/上海
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
999
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
48T 非一管式
贝类A群轮状病毒RNA核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
产品说明贝类 A 群轮状病毒 RNA 核酸检测试剂盒（PCR 荧光探针法）可针对贝类样品中 A 群轮状病毒的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于贝类样品中Ａ群轮状病毒的检测。检出限为 10³ CFU/ml。
产品组成（48 测试）
适用仪器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。
自备耗材和仪器
①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属
浴；⑥均质机、搅拌机或研钵等研磨器具；⑦电子天平。
注意事项
1. 本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1） 第一区：试剂准备区。
2） 第二区：样本制备区。
3） 第三区：扩增及产物分析区。
分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3. 严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4. 反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5. 反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6. 不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
样品处理
请参照《SN/T 2520-2010 贝类中 A 群轮状病毒检测方法 普通 PCR 和实时荧光 PCR 方法》进行；详细步骤请按照标准操作。首先用灭菌蒸馏水将贝壳表面的污泥清洗干净，打开贝壳后，倒掉腔内的液体，使用灭菌消毒的剪刀和镊子取贝类消化腺组织 5ｇ。在 5ｇ消化腺组织中加入 35 mL 匀浆缓冲液（磷酸缓氢二钠缓冲液，pH 9.6），匀
浆器充分匀浆 150 s；将匀浆液置于 37 ℃空气浴振荡摇床中，200 r/min 振荡 30 min；4 ℃，10000g，离心 10 min。
取 1 mL 上清液转移到 2 mL 离心管中，加入 0.14 mL 16% PEG8000 溶液（PEG 终浓度为 2%），颠倒 5 次混匀。冰上放置 1h，4℃，10000g，离心 10min，弃上清，保留沉淀。
实验操作
1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：
若有N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性对），将反应液置于0.6ml 或者1.5ml 离心管中，涡旋混匀，离心30 秒，分装于0.2ml PCR 管中。
2. 模板制备（样本制备区）
建议使用病毒基因组 DNA /RNA 提取试剂盒等商业化试剂盒，具体过程详见产品说明书。
3. 添加模板（样本制备区，放置于冰盒上进行）
在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中分别加入 5μL 模板，顺序为 NG、待测样品模板、PG-RA-P。盖好配套的
PCR 管盖后，涡旋混匀 30s，离心 1min，立即进行 PCR 扩增反应。
4. 扩增反应（扩增及产物分析区）
使用荧光定量 PCR 仪，荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 NONE。
按下列条件设置扩增反应：
5. 基线和阈值设定
基线调整取 3-15 个循环的荧光信号，阈值线应超过空白对照扩增曲线的最高点。
结果判定
检测样品 Ct≥40.0，曲线为直线或轻微斜线，无“S”型扩增曲线，可报告样品阴性，不含有轮状病毒或含量低
于检测限；
检测样品 Ct≤35.0，曲线呈“S”型扩增曲线，可直接报告样品阳性，含有轮状病毒；
检测样品 35.0＜Ct＜40.0，需进行一次重复实验，若 Ct 值≥40.0 则为阴性，否则为阳性。
NG 反应管结果显示“阴性”，PG 反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。
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贝类A群轮状病毒RNA核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
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