ELISA检测

ELISA检测

       酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。

       ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本，干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子（或受体）的水平。

材料与方法

1、材料

主要试剂：ELISA检测试剂盒  

检测指标	规格	货号	数量	批号
*****	96T	***	1	**

 1.2 主要仪器及耗材

酶标仪：北京普朗新技术有限公司

仪器型号：DNM-9602

洗板机：芬兰（Thermo Labsystems）

仪器型号：AC8

离心机：微量高速离心机（国产）

仪器型号：TG16W

培养箱：隔水式恒温培养箱（国产）

仪器型号：GNP-9080型

2、方法

实验过程

（1）标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔加样量都为

         50μL；

（2）加样：分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液

       40μL，然后再加待测样品10μL。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻

   轻晃动混匀；

（3）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；

（4）配液洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备

   用；小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec后弃去，如此重复

         5次，拍干；

（5）加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外；

（6）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；

（7）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec后弃去，如此

   重复5次，拍干；

（8）显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显

    色15min；

（9）终止：每孔加终止液50μL，终止反应；

（10）测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止

    液后15min以内进行。

计算

以标准物的浓度为纵坐标，OD值为横坐标，计算出标准曲线的多项式二次回归方程，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。



 

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