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- AAT Bioquest
- 17288
- 2025年11月06日
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- 文献和实验
- 技术资料
简要概述
产品基本信息
货号：17288
产品名称：TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*无ROX*
规格：1ml
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：24个月
产品物理化学光谱特性
溶剂：水
产品介绍
用于 TaqMan 探针的 TAQuest FAST qPCR Master Mix 是一种即用型 2X 溶液，针对 qPCR 和两步法 RT-qPCR 进行了优化，非常适合用于 TaqMan 基因表达分析。预混液与 FAST 条件兼容，因此在 20 uL 反应体积中进行 40 个 PCR 循环，可在 50 分钟内提供结果。预混液提供所有基本成分，包括我们专有的 TAQuest FAST 热启动 Taq DNA 聚合酶和优化的 PCR 缓冲液中的 dNTP，但模板、引物和探针除外。用于 TaqMan 探针的 TAQuest FAST qPCR Master Mix 设计用于使用具有卓越性能的内部阳性对照进行双重反应。预混液可确保所有样品类型（如基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板）的 PCR 特异性和灵敏度。该预混液不含 ROX 参考染料。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*无ROX*。
适用仪器
| qPCR | |
| 仪器规格 | 基于探针的滤波片 |
样品实验方案
注意 在室温下解冻TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*无ROX*。 使用前彻底涡旋 qPCR Master Mix。
1. 制备表 1 所示的下列反应混合物之一。
2. 轻轻涡旋混合试剂，然后短暂离心。
3. 在 qPCR 仪器中设置板并按表 2 所示操作。
表 1. 各反应每孔试剂组成
| 成分 | 体积 (25 µL/reaction) | 体积 (50 µL/reaction) | 最终浓度 |
| TAQuest FAST qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*无ROX* | 12.5 µL | 25 µL | 1X |
| 上游引物，10 µM | 0.25-2.5 µL | 0.5-5.0 µL | 0.1-1.0 µM |
| 下游引物，10 µM | 0.25-2.5 µL | 0.5-5.0 µL | 0.1-1.0 µM |
| DNA模板 | 1-5 µL | 1-5 µL | 优化的浓度 |
| 无核酸酶水 | 25 µL | 50 µL |
表 2. 热循环参数
| 范围 | 聚合酶激活 | PCR (30-40个循环) | ||
| Hold | 变性 | 退火 | 延伸 | |
| 温度 | 95 °C | 95 °C | 55-65 °C | 68-72 °C |
| 时间 (m:ss) | 0:20 | 0:30 | 1:00 | 1:00 |
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文献和实验一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
NaOH 中浸泡 10 分钟，用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。 当然，这些也不是绝对的要求。如果是操作熟练。完全可以用初次开封的离心管和枪头，新过滤的超纯水，进行 RNA 的提取。 2. Mix 配制 一般来讲，进行 real-time qPCR MasterMix 都是 2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于 real-time qPCR 灵敏度高，所以每个样品至少要做3 个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于 Ct 相差较多或者 SD 太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应
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