- ￥3450
- mlBio/酶联生物
- ml3000
- 国内
- 2025年07月16日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
线粒体呼吸链复合体Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶测试盒
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光，低温保存
- 规格：
100管/48样
线粒体呼吸链复合体Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶测试盒
微量法
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成，也可逆过程水解ATP。此外，复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。
测定原理：
复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：100mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：80mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：2 mL×1瓶，-20℃保存；
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入2mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂五：8mL×1瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入4mL蒸馏水，充分混匀；溶解后4℃保存一周；
试剂七：粉剂×1瓶, 4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分混匀；溶解后4℃保存一周；
试剂八：粉剂×1瓶, 4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分混匀；溶解后4℃保存一周；
试剂九：液体10mL×1 瓶，室温保存。
定磷试剂的配制：按H2O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制，配的定磷试剂应为浅。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染（请根据需要，用多少配多少）。
注意：配试剂用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，或者一次性塑料器皿，以避免磷污染。
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
①准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅴ（此步可选做）。
⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入800uL试剂二和8uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅴ酶活性测定。
测定步骤：
1、酶促反应（在EP管中加入下列试剂）
| 试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 |
| 试剂四 | 10 | 10 |
| 试剂五 | 40 | 40 |
| 样本 | 50 |
| 试剂六 | 20 | 20 |
| 样本 | 50 |
2、定磷(在EP管或96孔板中加入下列试剂）
| 上清液 | 30 | 30 |
| 定磷试剂 | 170 | 170 |
复合体Ⅴ活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
标准条件下测定的回归方程为y = 1.274x + 0.004；x为标准品浓度（mmol/L），y为A值。
1、组织中复合体Ⅴ活性的计算:
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min/mg prot）=[(ΔA-0.004) ÷1.274×V反总×106]÷(V样×Cpr) ÷T
=62.8× (ΔA-0.004) ÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2） 按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /g 鲜重）=[(ΔA-0.004) ÷1.274×V反总×106]÷(W× V样÷V样总) ÷T =50.7× (ΔA-0.004) ÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /104 cell）=[(ΔA-0.004) ÷1.274×V反总×106]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.101× (ΔA-0.004)
V反总：反应体系总体积，1.2×10-4 L； V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，0.808 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.637x + 0.004；x为标准品浓度（mmol/L），y为A值。
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /mg prot）=[(ΔA-0.004) ÷0.637×V反总×106]÷(V样×Cpr) ÷T=125.6× (ΔA-0.004) ÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2） 按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /g 鲜重）=[(ΔA-0.004)÷0.637×V反总×106]÷(W× V样÷V样总) ÷T=101.5× (ΔA-0.004) ÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol 无机磷定义为一个酶活性单位。
复合体Ⅴ活性（nmol/min /104 cell）=[(ΔA-0.004)÷0.637×V反总×106]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.203× (ΔA-0.004)
线粒体呼吸链复合体Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶测试盒V反总：反应体系总体积，1.2×10-4 L； V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，0.808 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验高脂饮食的危害又添实锤！用这种方式悄悄影响你的心脏，一种肠炎
科的小鼠分为两组，分别进行低脂肪或高脂肪饮食饲养（10% 或 60% 脂肪），结果发现高脂饮食会导致粪便中大肠杆菌的携带量显著增加，这也反映了高脂肪饮食的确能够驱动肠杆菌科的丰度。此外，高脂肪饮食还与肠上皮细胞线粒体活性降低有关，从结肠上皮细胞的 mRNA 中线粒体标志物表达减少可以证实这一点，同时，三磷酸腺苷和丙酮酸脱氢酶水平的降低也可以佐证。图片来源：Science接下来，为了研究高脂肪饮食损害的线粒体生物能是否与结肠上皮细胞氧合增加有关，他们使用外源性缺氧标记物哌莫硝唑观察上皮细胞的缺氧状况
Pyrosequencing是对短到中等长度的DNA序列样品进行高通量的、精确和重复性好的分析的技术。第一步 ――测序引物和PCR扩增的、单链的DNA模板杂交，与酶―DNA聚合酶（DNA polymerase）、ATP硫酸化酶（ATP sulfurylase）、荧光素酶（luciferase）、三磷酸腺苷双磷酸酶（apyrase）―和底物―adenosine 5´ phosphosulfate (APS)、荧光素（luciferin）孵育。第二步 ――四种dNTP（dATPS，dTTP
的作用是调控基因表达。例如组蛋白甲基化多导致基因沉默，去甲基化则相反；乙酰化一般是转录激活，去乙酰化则相反。当然，也可在此基础上产生复杂的生物学效应。例如组蛋白去乙酰化酶 HDAC 可影响免疫系统；H3K4me3、H3K9me2 能够调控记忆的形成, 而且 H3K 甲基化与 X 染色体失活、基因组印记和异染色质形成有关；H3 乙酰化通过多种机制调控以来 ATP 的染色质重塑 ，并参与炎症反应；H2A、H2B 泛素化则与 DNA 损害反应有关；而 H3S28 磷酸化与 H3K27 乙酰化可激活转录
技术资料
