- ￥1380
- mlBio/酶联生物
- ml2987
- 国内
- 2025年07月22日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
87
- 英文名：
脱氢抗坏血酸还原酶DHAR活性测试盒
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光，低温保存
- 规格：
100管/96样
脱氢抗坏血酸还原酶DHAR活性测试盒
微量法
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
DHAR存在于细胞质、线粒体和叶绿体中。DHAR催化GSH还原DHA生成AsA和GSSG，调控细胞AsA/DHA比值，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。提高植物体内的 DHAR 活性，可提高植物食品中AsA含量，进而提高植物食品的营养品质。
测定原理：
DHAR催化GSH还原DHA生成AsA，通过测定DHA减少速率，计算DHAR活性。
实验中所需仪器及设备：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体17.5mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。临用前加入2.5 mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.5 mL蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取：
1.按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g 4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
DHAR测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL试剂三、20μL试剂四和140μL 试剂二，后加20μL上清液迅速混匀后于265nm比色，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A2-A1。
DHAR活性计算公式：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T= 92×△A ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克样本每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T= 92×△A ÷W
(3). 按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每104个细胞每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T= 92×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升样本每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V反总×109÷V样÷T= 92×△A
ε ：AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104 L/mol /cm；106：摩尔分子换算成微摩尔分子；d：比色杯光径，1cm；V反总：反应体系总体积，0.2mL=2×10-4 L；V样：反应体系中加入上清液体积，20μL =0.02mL；V样总：提取液体积，1 mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL；W ：样品质量；T：反应时间，2 min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T= 184×△A ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克样本每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T= 184×△A ÷W
(3). 按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每104个细胞每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T= 184×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升样本每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V反总×109÷V样÷T= 184×△A
脱氢抗坏血酸还原酶DHAR活性测试盒ε ：AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104 L/mol /cm；106：摩尔分子换算成微摩尔分子；d：96孔板光径，0.5 cm；V反总：反应体系总体积，0.2mL=2×10-4 L；V样：反应体系中加入上清液体积，20μL =0.02mL；V样总：提取液体积，1 mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL；W ：样品质量；T：反应时间，2 min。
注意事项：
临用前配制的试剂未使用完的4℃保存，3天内使用完。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验佚名 体内催化氧化反应的酶有许多种，按照其催化氧化反应方式不同可分为三大类。 (一)脱氢氧化酶类 这一类中依据其反应受氢体或氧化产物不同，又可以分为三种。 1.氧化酶类(oxidases) 氧化酶直接作用于底物，以氧作为受氢体或受电子体，生成产物是水。氧化酶均为结合蛋白质，辅基常含有Cu2+，如细胞色素氧化酶、酚氧化酶、抗坏血酸
自身被氧化为氧化型谷胱甘肽(GSSG)。后者在谷胱甘肽还原酶催化下，由NADPH＋H＋供氢重新还原为GSH。(图10－21)。 图10－21 谷胱甘肽的氧化与还原 催化NADPH生成的关键酶为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。此酶缺陷的病人一般情况下无症状，但有外界因素(如进食某种蚕豆)影响，即引起溶血。因吃蚕豆可诱导发病，故这种病又称蚕豆病。 2.高铁血红蛋白(methemoglobin MHb)的还原：由于各种氧化作用，红细胞内经常有少量MHb产生，而由于红细胞内有一系列酶促
色素氧化酶、酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶等。抗坏血酸氧化酶可催化下述反应： 2.需氧脱氢酶类(aerobic dehydrogenases) 需氧脱氢酶以FAD或FMN为辅基，以氧为直接受氢体，产物为H2O2或超氧离子(O2)，某些色素如甲烯蓝(methylene blue,MB)、铁氰化钾(［K3Fe(CN)6］、二氯酚靛酚可以作为这类酶的人工受氢体。如D�氨基酸氧化酶(辅基FAD)、L-氨基酸氧化酶(辅基FMN)、黄嘌呤氧化酶(辅基FAD)、醛脱氢
技术资料
