- ￥1180
- Xkbio
- XK-SJH-A216
- 国产
- 2025年07月11日
企业认证
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Dehydroascorbate reductase (DHAR) activity test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
脱氢抗坏血酸还原酶（dehydroascorbate reductase，DHAR）试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义：
DHAR 存在于细胞质、线粒体和叶绿体中。DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA 和 GSSG， 调控细胞 AsA/DHA 比值，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。提高植物体内的DHAR 活性，可提高植物食品中 AsA 含量，进而提高植物食品的营养品质。测定原理：
DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA，通过测定 DHA 减少速率，计算 DHAR 活性。实验中所需仪器及设备：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、可调式移液器和蒸馏水。试剂组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 17.5mL×1 瓶，4℃保存。试剂三：粉剂×1 瓶（棕色），4℃保存。临用前加入 2.5 mL 蒸馏水充分溶解。试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 2.5 mL 蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取：
- 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入
- 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；8000g 4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。
- 血清等液体：直接测定。
DHAR 测定操作：
- 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 265nm，蒸馏水调零。
- 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。
- 在微量石英比色皿/96 孔板中依次加入 20μL 试剂三、20μL 试剂四和 140μL 试剂二，最后加 20μL 上清液迅速混匀后于 265nm 比色，记录 30s 和 150s 的吸光值 A1 和 A2，△ A=A2-A1。
DHAR 活性计算公式：
- 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下(1). 按蛋白浓度计算
DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T
= 92×△A ÷Cpr
- 按样本质量计算
DHAR(nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T
= 92×△A ÷W
- 按细胞数量计算
DHAR(nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T
= 92×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷V 样÷T
= 92×△A
ε ：AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol /cm；106：摩尔分子换算成微摩尔分子； d：比色杯光径，1cm；V 反总：反应体系总体积，0.2mL=2×10-4 L；V 样：反应体系中加入上清液体积，20μL =0.02mL；V 样总：提取液体积，1 mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL； W ：样品质量；T：反应时间，2 min。
- 使用 96 孔板测定的计算公式如下
- 按蛋白浓度计算
DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T
= 184×△A ÷Cpr
- 按样本质量计算
DHAR(nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T
= 184×△A ÷W
- 按细胞数量计算
DHAR(nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T
= 184×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷V 样÷T
= 184×△A
ε ：AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol /cm；106：摩尔分子换算成微摩尔分子； d：96 孔板光径，0.5 cm；V 反总：反应体系总体积，0.2mL=2×10-4 L；V 样：反应体系中加入上清液体积，20μL =0.02mL；V 样总：提取液体积，1 mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL； W ：样品质量；T：反应时间，2 min。
注意事项：
临用前配制的试剂未使用完的 4℃保存，3 天内使用完。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验佚名 体内催化氧化反应的酶有许多种，按照其催化氧化反应方式不同可分为三大类。 (一)脱氢氧化酶类 这一类中依据其反应受氢体或氧化产物不同，又可以分为三种。 1.氧化酶类(oxidases) 氧化酶直接作用于底物，以氧作为受氢体或受电子体，生成产物是水。氧化酶均为结合蛋白质，辅基常含有Cu2+，如细胞色素氧化酶、酚氧化酶、抗坏血酸
自身被氧化为氧化型谷胱甘肽(GSSG)。后者在谷胱甘肽还原酶催化下，由NADPH＋H＋供氢重新还原为GSH。(图10－21)。 图10－21 谷胱甘肽的氧化与还原 催化NADPH生成的关键酶为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。此酶缺陷的病人一般情况下无症状，但有外界因素(如进食某种蚕豆)影响，即引起溶血。因吃蚕豆可诱导发病，故这种病又称蚕豆病。 2.高铁血红蛋白(methemoglobin MHb)的还原：由于各种氧化作用，红细胞内经常有少量MHb产生，而由于红细胞内有一系列酶促
色素氧化酶、酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶等。抗坏血酸氧化酶可催化下述反应： 2.需氧脱氢酶类(aerobic dehydrogenases) 需氧脱氢酶以FAD或FMN为辅基，以氧为直接受氢体，产物为H2O2或超氧离子(O2)，某些色素如甲烯蓝(methylene blue,MB)、铁氰化钾(［K3Fe(CN)6］、二氯酚靛酚可以作为这类酶的人工受氢体。如D�氨基酸氧化酶(辅基FAD)、L-氨基酸氧化酶(辅基FMN)、黄嘌呤氧化酶(辅基FAD)、醛脱氢
