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- 2026年02月08日
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大家在细胞培养实验中，是否会经常遇到很多困扰已久问题：如何正确使用抗生素？如何高效进行细胞冻存？怎样解决细胞培养中的支原体污染？如何提高干细胞诱导分化成功率……为帮助大家解决在做实验过程中遇到的各种问题，赛业OriCell® 精心准备了细胞培养常见问题解答工具书，不管你是想知道细胞复苏、传代、冻存、污染，还是干细胞诱导分化中遇到的问题，亦是如何挑选合适的血清，来这里免费领取宝典！
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问题一：干细胞生长缓慢
原因：
1. 接种细胞起始浓度太低；
解决对策：
问题二：非正常死亡
原因：
解决对策：
问题三：接种培养时孔内细胞中间密两边稀
原因：
这是典型的“过犹不及”。很多人接种时担心摇的次数少会造成细胞分布不均匀，就反复多次地摇，结果细胞全部集中在中间。
解决对策：
其实只要把握好幅度和力度，前后、左右交替摇三四次就已经足够了，不论孔板、皿或者培养瓶。对于孔板这样的较小的容器，实际每孔加的培养基总量不会超过2mL，不如直接用合适的移液枪在孔板内吹打之后放平，更能获得良好的效果。
问题四：细胞冻存后复苏活率低或复苏失败
原因：不恰当的冻存方法，冻存时细胞状态和活力不行，不合理的冻存密度。
解决对策：
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问题一：干细胞生长缓慢
原因：
1. 接种细胞起始浓度太低；
2. 胰蛋白酶消化过度；
3. 支原体污染。
解决对策：
1. 尽量使用低代次细胞进行实验；
2. 接种浓度：建议2.5~4×104个活细胞/cm2；
3. 消化时在显微镜下看到大部分细胞变圆变亮，轻轻拍打培养瓶两侧可见大部分细胞脱落，此时立即终止消化；
4. 定期做支原体检测，排除支原体污染。
问题二：非正常死亡
原因：
1. 培养箱内无CO2或者箱内温度波动大；
2. 细胞复苏或冻存时受到损伤；
3. 细胞培养液渗透压不准确或有毒代谢物堆积；
4. 细胞污染。
解决对策：
1. 定时维护CO2培养箱；
2. 实验操作过程中轻柔，不可用力过大，以免使细胞受到机械损伤；
3. 正确配制培养液，定时更换新鲜培养液；
4. 注意无菌操作。
问题三：接种培养时孔内细胞中间密两边稀
原因：
这是典型的“过犹不及”。很多人接种时担心摇的次数少会造成细胞分布不均匀，就反复多次地摇，结果细胞全部集中在中间。
解决对策：
其实只要把握好幅度和力度，前后、左右交替摇三四次就已经足够了，不论孔板、皿或者培养瓶。对于孔板这样的较小的容器，实际每孔加的培养基总量不会超过2mL，不如直接用合适的移液枪在孔板内吹打之后放平，更能获得良好的效果。
问题四：细胞冻存后复苏活率低或复苏失败
原因：不恰当的冻存方法，冻存时细胞状态和活力不行，不合理的冻存密度。
解决对策：
1. 缓慢冷冻；
2. 细胞应在生长良好、致密度约为 80-90％、活力达90%以上的状态下冻存；
3. 冻存时细胞密度少于5×105个活细胞/mL时，很难成功复苏；
4. 冻存管的盖子一定要拧紧，否则水浴复苏时水会渗入造成污染；
5. 细胞不可长期保存在-80℃冰箱中。我们建议在-80℃冰箱中的保存时间不要超过48h。
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