磷酸化抗体定制服务

      卡梅德生物（KMD Bioscience）多年来致力于抗体制备研究。我们拥有专门的抗体制备团队，成熟的抗体制备技术，完善的抗体制备平台，能够为客户提供多种磷酸化抗体制备服务。
  蛋白磷酸化在细胞信号传导及凋亡过程中起到了重要作用，是维系细胞生命的活动调控中枢。磷酸化抗体是研究蛋白质磷酸化的重要工具。卡梅德生物凭借多年的项目经验，能够开发出性能不弱于细胞信号转导公司(CST)磷酸化多克隆抗体和单克隆抗体。我们提供的针对特定磷酸化位点的多克隆及单克隆抗体定制服务，目前项目全部达标。
  卡梅德生物的科学家能够为客户提供一站式磷酸化抗体制备服务，包括磷酸化多肽设计、实验方案设计及相关验证服务，包括磷酸化与非磷酸化的抗原交叉反应，Western Blot和免疫组化等，以满足不同客户的项目需求。

磷酸化抗体简述：
    翻译后修饰是调节蛋白质功能的重要方式，参与和调节许多关键的生命活动过程。蛋白磷酸化是重要的翻译后修饰方式，主要涉及到蛋白生物活性水平的调节，包括激活或抑制蛋白质活性，从而进一步调节细胞信号转导通路。在细胞水平上准确地定量磷酸化蛋白质对于破译和了解细胞功能至关重要。
    免疫原经过磷酸化，用其制备的抗体就称之为磷酸化抗体。磷酸化抗体可以特异性的识别蛋白磷酸化位点，可用于区分蛋白质磷酸化及非磷酸化的存在形式，对磷酸化蛋白进行定性和定量分析。
    卡梅德生物为客户提供不同方案的磷酸化抗体制备服务，包括传统抗体制备，如鼠单克隆杂交瘤制备技术与多克隆抗体制备技术，以及非传统的重组抗体制备技术。
    基于传统抗体制备技术的磷酸化抗体制备服务包括：磷酸化位点的分析，磷酸化与非磷酸化多肽抗原设计与合成，动物免疫与血清效价评价以及抗体纯化与配对等。交付的抗体通过磷酸化多肽与非磷酸化多肽的双重检测确认，保证抗体交付质量合格。
主要制备流程：
 



抗体制备服务 — 磷酸化抗体制备 
  蛋白磷酸化是细胞中重要的后翻译修饰作用(PTM)，主要涉及到蛋白生物活性水平的调节，包括活化或抑制蛋白质活性，从而进一步调节细胞信号转导通路。在真核生物中，蛋白质磷酸化位点为丝氨酸，苏氨酸和酪氨酸；在原核生物中磷酸化位点主要为组氨酸。卡梅德生物可为客户提供基于噬菌体展示技术的磷酸化单克隆重组抗体制备服务。 

基于噬菌体展示的磷酸化抗体制备服务：
  卡梅德生物为客户提供的服务包括磷酸化位点的分析，磷酸化与非磷酸化多肽抗原设计与合成，噬菌体抗体文库构建以及抗体纯化与配对服务。

服务流程与内容：

步骤	服务内容	交付
抗原设计与合成	1. 客户提供抗原(多肽，蛋白)，纯度>90% 2. 卡梅德设计与合成磷酸化与非磷酸化抗原（可选）	（抗原由卡梅德制备） *磷酸化与非磷酸化抗原的MS和HPLC 报告 *2-5 mg 磷酸化多肽, 纯度>90% *2-5 mg非磷酸化多肽, 纯度>90%
动物免疫	方案一：免疫5 只Balb/c 小鼠(采用小鼠免疫佐剂，20天即可快速产生高抗体滴度血清)，ELISA检测血清效价 方案二：免疫2-3 新西兰大白兔（采用兔专用免疫佐剂，28天可产生高抗体滴度），ELISA检测血清效价(其他动物可选)	*1-2ml免疫前血清 *ELISA血清效价验证报告
抗体噬菌体展示文库制备	1. 收集免疫后的淋巴B细胞 2. 提取mRNA，PCR克隆cDNA，噬菌体载体构建，转化，扩增 3. 磷酸化与非磷酸化抗原进行抗体文库正筛和反筛 4. 阳性克隆再进行扩增，穿梭质粒构建 5. 小规模与大规模哺乳体系表达（293，CHO），抗体纯化与验证	*重组表达质粒 *2-5 mg 纯化重组抗体 *ELISA报告，含效价，交叉实验报告 *抗体识别磷酸化抗原效价不低于105且不与非磷酸化抗原反应（ELISA） *Western Blot验证报告（可选）

服务优势：

--先进的抗原设计技术：自主研发的抗原设计软件、免疫佐剂、抗原制备技术，设计的抗体特异性高、亲和力强
--高抗体效价：保证型抗体ELISA效价可达10⁴     
--全程可追溯的文件支撑体系，GMP/GLP级别
--严格的质控体系，经验丰富的实验技术人员，完善的动物生产设施，交付周期短
--拥有高通量的抗体筛选平台：日筛10,000个克隆抗体
--自主优化的特异性抗体纯化技术，得到灵敏度很高的磷酸化抗体
--提供从抗原设计到抗体制备的一站式服务，快捷便利
--项目可追踪：定期汇报机制将保证您远程了解实验进展，合理安排下一步实验

公司介绍：

卡梅德生物科技（天津）有限公司作为国家高新技术企业，专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务，单、多克隆抗体开发，噬菌体文库构建与筛选服务；同时，基于我公司成熟的五大核心技术服务平台，成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。

核心平台：

---噬菌体抗体展示技术平台

卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体（M13，T7噬菌体）展示技术平台，能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体（纳米抗体/驼类纳米抗体）制备方案，包括动物免疫，文库建立，文库筛选以及重组抗体的体外表达等。



---抗体工程技术平台

卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台，多克隆抗体制备服务平台，抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台：基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台，能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体，同时基于噬菌体展示技术，我司能够制备多物种的重组单克隆抗体，包括小鼠，兔子，骆驼，羊驼以及人单抗。

多克隆抗体制备服务平台：能够为客户提供兔多抗，羊多抗，骆驼类多抗，牛多抗等多物种的抗体制备服务，根据不同的抗原类型，来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案，以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。

抗体一级序列测序平台：为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求，我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务；同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。

抗体改造技术平台：卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备，抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体，均成功交付。



---蛋白表达与纯化服务技术平台

卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台，能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。

哺乳动物表达平台： 目前公司拥有Freestyle CHO，Expi CHO，CHO-DG44，HEK293F，Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则，全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂，以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系，相比市面常用蛋白表达载体，能够为客户提供更高纯度的蛋白。

昆虫细胞表达平台：目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9，配套使用的是来自Gibco的培养基，只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台，我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白，包括多种GPCR家族成员蛋白。

原核蛋白表达平台：大肠杆菌（E.coli）重组蛋白表达技术经过多年的发展，已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达，一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备，针对每位客户的需求，我们的都会提供具体的方案设计。

酵母蛋白表达平台：毕赤酵母，酿酒酵母等蛋白表达体系，适用于需要真核表达蛋白，同时兼具产量与性价比的项目需求特点。

植物表达平台：为了提供更好的服务，卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务，项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度，高质量的植物来源的蛋白，已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。

---蛋白批量发酵平台

超高密度发酵技术：卡梅德生物科技能够为客户提供5L，10L,30L，80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务（微载体贴壁培养技术），人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml，适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵，能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台，我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。

同时，借助有氧发酵技术，我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务，采用有氧发酵类型的原核发酵技术，蛋白产量比传统的原核发酵要高（相差接近100倍蛋白产量和得率）。

---蛋白纯化技术平台：

我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪，同时拥有GE全套填料，包括Sphedax 75/200,500, G25,G100，CMFF,Q-FF，DEAE以及不同规格的预装柱等，能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业，硕士博士学历占比98%，因此有能力为客户提供快速，高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。



---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台

稳定细胞系构建平台：卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务，如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默，敲除，过表达等稳定细胞系；同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染（Lipofectin2000/3000）的稳定转染细胞系构建服务，如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。

卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆，蛋白定量，免疫印迹检测（SDS-PAGE、WB），宿主核酸检测，蛋白抗体亲和纯化，ELISA操作，内毒素检测，HPLC分析，免疫组化，IP，免疫浊度，流式细胞术等服务。