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文献和实验度太低或者达到100%都不利于转染。 2、我用质粒转293时，用的QIAGEN的FILTER那种试剂盒提的质粒，感觉QIAGEN的这个试剂盒很好，提的质粒比较纯。提的质粒纯度很重要。 3、在转染前的质粒DNA一定要用去离子水溶。 4、适当调整质粒DNA与lipofectamine的比例。如果你提的质粒比较纯的话，就参考lipofectamine 2000的说明书操作就可以了。我当时用的60mm的培养板，质粒DNA用的8μg，lipofectamine 2000用的20μl。 5、转染
相关专题 293细胞 AAV-293细胞 较喜欢成团生长，比较娇嫩，怕冷，传代时不要一次从二氧化碳培养箱拿出很多瓶，一次只要拿2-3瓶出来传就可以了，否则细胞很容易死掉。细胞在50-60%传代，细胞生长状态最好。 用D-Hank's液配制成0。25%的胰酶消化半分钟左右，弃去胰酶。观察培养瓶是否有针孔样缝隙，如有就可以加入培养液吹打细胞。消化过久，对细胞损害很大，而且成团很难吹打成单个细胞。然后加入含有10%小牛
Transient transfection into 293T cells
: optional) • Transfection reagents: i) 2M CaCl2 : 2M in H2 O, filter sterile, store at 4°C ii) x2HBS: 8.0g NaCl, 0.37g KCl, 201mg (yes! mg) Na2 HPO4 •7H2 O, 1.0g glucose, 5.0g HEPES/500ml (adjust pH to 7.05 with NaOH and filter sterile
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