快速内切酶EcoRV

启动子克隆方法研究进展

性，在胡萝卜II型转化酶基因启动子的克隆方面取得了新的进展。首先将胡萝卜基因组DNA 分别用PvuI、SmaI、DraI、EcoRV酶切，并设计了1个衔接头长链序列和1个衔接头短链序列，并在衔接头短链的3'末端带有1个氨基的衔接头，能够阻止聚合酶催化的衔接头短链的延伸，同时衔接头的长链和短链之间是反向重复序列。将酶切片段与此衔接头连接，取连接产物做模板，以衔接头引物和基因特异引物做PCR ，在首轮PCR 中只有限定的远端基因特异引物有结合位点，当基因特异引物延伸产生的DNA 链通过衔接头时，才能产生衔

【资源】实验三 质粒DNA的酶切

缓冲液（50´储存液），10´加样缓冲液，1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌）。 6．操作步骤 （1)混合下列溶液于一个无菌的1.5ml微量离心管中： Pinpoint™xa-3 DNA (或pUCm-T-CHI ) 6 μl 10×酶切缓冲液（用EcoRV的缓冲液） 2 μl ddH2O 30 μl EcoRV 1μl BamHI 1μl 总体积 40μl （2）先准备一个冰盒并放入一定量的冰块。从-20℃冰柜中取出限制性内切酶，立即插入冰块中

高质量的内切酶 vs.普通内切酶

不好的内切酶常常被各种 蛋白酶 、非特异外切酶和核酸外切酶污染。 使用被外切酶污染的内切酶切割DNA，则会在切割底物的同时破坏产物的末端（外切酶偷偷切掉1、2个bp，琼脂糖电泳却看不出来），让后续的连接、克隆和表达出现问题！ 而NEB提供的内切酶大部分都经过重组改造，在最大程度上避免了外切酶污染的问题，让你的基因安全可靠！