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- Xybio
- 上海
- P1532
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
GV2260 Strain
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：GV2260根癌农杆菌
别称: GV2260 Strain
抗性：Rif
培养基：YEB
菌株类别：农杆菌
培养条件：28℃，有氧，YEB
质粒转化：电转、化转
保存方式：30%甘油，-20℃
基本应用：转基因
质粒简介
GV2260质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1175/pUC57-Simple-gRNA backbone爪蟾编辑质粒 |
| P1823/pXT7-Cas9爪蟾编辑质粒 |
| P0385/pIB139链霉菌质粒 |
| P4556/pIB139质粒菌种 |
| P0840/pSET4S自杀敲除质粒 |
| P1757/pOJ260链霉菌质粒 |
| P0386/pOJ446链霉菌质粒 |
| P4557/pOJ446质粒菌种 |
| P0480/pJTU1278链霉菌质粒 |
| P0804/pFW5链霉菌质粒 |
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文献和实验的转化方法 1 根癌农杆菌介导转化法 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌。它能在自然条件下感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤(crown gall tumor)。根癌农杆菌细胞中含有Ti 质粒(tumor-inducing plasmid，瘤诱导质粒)。在Ti 质粒上有一段T-DNA(T-DNA region)，即转移-DNA(transfer-DNA)，又称为T区(T region)。根癌农杆菌通过侵染
包括基因转化方法、受体的再生能力、受体材料的生理状态和再生途径，以及体细胞无性系变异的发生等，其中限制基因转移的首要因素当属受体的再生能力，因为建立高频植株再生体系是植物基因转化的一个重要条件，但是其他因素在不同程度上和以不同方式影响植物基因转化的有效性。本文将对基因受体选择需要考虑的几个因素加以考察。 1 基因受体的选择要考虑基因转化方法和受体的再生能力 对双子叶植物进行遗传转化通常采用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens ）载体系统，利用该载体
质粒分为三大类，感染的植物诱导合成这些有机碱，但不能利用它们，其分解酶基因在Ti质粒上，分解产物为氨基酸和糖类，供根癌农杆菌使用作为氮源及碳源。 2.T-DNA 的整合机制： T-DNA 的详细整合机制尚不清楚，但有几个环节是明确的： T-DNA 切除由Vir区编码的特异性内切酶完成，分别在LB和RB的第三个碱基和第四个碱基之间产生缺口，并形成单链T-DNA 。 T-DNA 的LB和RB在整合中的作用是不对称的，RB顺序与整合有关，而LB无关。 T-DNA 的整合可以是单拷贝
