Tuner(DE3)大肠表达菌

基本信息
名称：Tuner(DE3)大肠表达菌
别称: Tuner(DE3) Strain
抗性：无
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌
培养条件：37℃，有氧，LB
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：用于蛋白表达
备注：

质粒简介
 Tuner系列菌株是LacZY去除的BL21突变菌株，这可以通过细胞培养来调节蛋白表达水平。lac通透酶(lacY)突变使得IPTG能够进入所有的细胞菌内。不像乳糖或者阿拉伯糖，IPTG是一个可以通过lac通透酶途径进入细胞内的诱导剂。这使得菌株可以使得IPTG的蛋白诱导具有IPTG的浓度依赖性。与 pET系列载体联合使用，可以使得蛋白表达从低表达水平到超高表达水平进行有效调节。蛋白表达水平低的情况下，目的蛋白可能会具有更好的可溶性和生理活 性。
Tuner系列菌株的蛋白表达水平可以通过IPTG浓度进行精确的调节，具有严格的浓度依赖性。Tuner系列菌株还是lon和ompT蛋白酶缺陷型菌株。DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。

质粒图谱


质粒序列：详询


质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3141/pLJM1-EGFP慢病毒表达质粒

P0675/pHIV-H2BmRFP慢病毒表达质粒

P0800/pLenti-EF1α-Puro慢病毒表达质粒

P4526/pLenti-CMV-MCS-GFP-SV-puro慢病毒表达质粒

P4868/pWPI病毒表达质粒

P0820/pWPXL慢病毒表达质粒

P0822/pWPXLd慢病毒表达质粒

P0882/pLEGFP-N1慢病毒表达质粒

P0921/pL-SIN-PGK-EGFP慢病毒表达质粒

P0922/pLVPT-tTR-KRAB慢病毒表达质粒

P0923/pLVPT-rtTR-KRAB-2SM2慢病毒表达质粒