- ￥700
- 烜雅生物
- XY-ZL0024
- 国产
- 2025年12月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
200
- 英文名：
pBR322
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：pBR322
形式：质粒干粉
参考用途：pBR322 是较常用的大肠杆菌克隆载体
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB+氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α）
存储条件：2-8℃
安全等级：1
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800μl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 μl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验都中止。但松弛型质粒仍继续进行复制。因此在增殖松弛型质粒时，总是要让宿主菌经氯霉素处理（在培养液中加入适量的氯霉素）抑制蛋白质的合成。图23-3 pBR322的基本结构（一）大肠杆菌质粒应用的最广泛的质粒载体是pBR322，它属松弛型质粒，有抗氨苄青霉素和抗四环素两个抗性基因可作为标记基因，有许多种常用的限制酶的切点。它全长4352个核苷酸，排列顺序已全部测定，基本结构如图23-3。当需要用pBR322来克隆BamHI酶切的一个DNA片段时，一般的做法是如图23-4所示。图23-4 pBR322克隆
相关专题 那些实验室常用的克隆载体 pUC18 和 pUC19质粒图谱 pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱 。 这两个质粒的结构几乎是完全
体长4362 bp，它有一个来自大肠杆菌中高拷贝天然质粒的复制起点(ori)，这个复制起点可使pBR322在大肠杆菌中的拷贝数达到20个，因而pBR322载体的DNA很容易从大肠杆菌中提取出来。这是pBR322中的第一个结构特征。 图1 大肠杆菌克隆载体pBR322的物理图谱 此载体中有两个标记基因，一个是氨苄青霉素抗性基因（Apr），另一个是四环素抗性基因（Tcr）。氨苄青霉素和四环素都是人类治疗疾病的抗生素药物。当把pBR322 DNA转化大肠杆菌细胞，其中部分细胞就被该载体
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