C43(DE3)pLysS大肠有毒蛋白表达菌

基本信息
名称：C43(DE3)pLysS大肠有毒蛋白表达菌
别称: C43(DE3)pLysS Strain
抗性：Chl
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌
培养条件：37℃，有氧，LB
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：用于蛋白表达
备注：


质粒简介
 C43(DE3) pLysS是一个大肠杆菌表达菌株，抗性是氯霉素Chl，可用LB，37℃培养。C43(DE3)菌株起源于 BL21(DE3) ，其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。C41(DE3)跟BL21(DE3) 的区别在于其基因组含有至少一个未知突变，这个未知突变使其获得了高效表达毒性蛋白（1-5）的能力，此突变位点参与大肠杆菌表达毒性蛋白时的细胞死亡途径；C43(DE3) 来源于C41(DE3) ，是通过筛选C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株获得。C43(DE3) 菌株具有比C41(DE3)更强的表达毒性蛋白和疏水性蛋白的能力，所以说C43(DE3) 菌株与BL21(DE3)相比拥有至少两个未知突变，正是这两个未知突变使其获得了更广泛的表达毒性蛋白或疏水性蛋白的能力。此菌株含有DE3区，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。C43(DE3) pLysS 比C43(DE3)多一个pLysS质粒，能更有效地表达有毒蛋白。

质粒图谱


质粒序列：详询


质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0885/pHrdSV40-scFv-GCN4-sfGFP-VP64-GB1-NLS哺乳编辑质粒

P0886/pgRNA-humanized哺乳编辑质粒

P0887/pespCas9-Puro哺乳编辑质粒

P0888/pespCas9-GFP哺乳编辑质粒

P0890/pMSP1830-SaCas9KKH哺乳编辑质粒

P0905/pCRISPRainbow-DONOR1哺乳编辑质粒

P0906/pHAGE-TO-dCas9哺乳编辑质粒

P1009/gRNA_Cloning Vector哺乳编辑质粒

P0951/pLH-sgRNA1哺乳编辑质粒

P0965/AIO-mCherry哺乳编辑质粒

P1035/pSLQ1651-sgTelomere(F+E)哺乳编辑质粒