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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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2年
- 英文名：
pBBR1MCS1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pBBR1MCS-1广宿主表达质粒
别称: pBBR1MCS1
质粒属性
质粒简介
广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-1是由Kovach等构建，已经证实可以在许多革兰氏阴性菌中进行复制[2]，包括Acetobacter xylinum、Alcaligenes eutrophus、Bartonella bacilliformis、百日咳杆菌（Bordetella spp.）、布鲁氏菌（Brucella spp.）、Caulobacter crescentus、大肠杆菌、Paracoccous denitrificans、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、恶臭假单胞菌（P. putida）、苜蓿根瘤菌（Rhizobium meliloti）、R. leguminosarum by. Viciae、球形红假单胞菌（Rhodobacter sphaeroides）、鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）、霍乱弧菌（Vibrio cholerae）和Xanthomonas campestris等。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4707 bp ds-DNA circular SYN 04-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBBR1MCS-1
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4707)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4707
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin 1023..1792
/note="pBBR1 oriV"
/note="replication origin of the broad-host-range plasmid
pBBR1 from Bordetella bronchiseptica; requires the pBBR1
Rep protein for replication"
CDS 1793..2455
/codon_start=1
/product="replication protein for the broad-host-range
plasmid pBBR1 from Bordetella bronchiseptica"
/note="pBBR1 Rep"
/translation="MATQSREIGIQAKNKPGHWVQTERKAHEAWAGLIARKPTAAMLLH
HLVAQMGHQNAVVVSQKTLSKLIGRSLRTVQYAVKDLVAERWISVVKLNGPGTVSAYVV
NDRVAWGQPRDQLRLSVFSAAVVVDHDDQDESLLGHGDLRRIPTLYPGEQQLPTGPGEE
PPSQPGIPGMEPDLPALTETEEWERRGQQRLPMPDEPCFLDDGEPLEPPTRVTLPRR"
CDS complement(3013..3378)
/codon_start=1
/gene="lacZ fragment"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/note="lacZ-alpha"
/translation="MTMITPSAQLTLTKGNKSWVPGPPSRSTVSISLISNSCSPGDPLV
LERPPPRWSSNSPYSESYYARSLAVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEAR
TDRPSQQLRSLNGEWKL"
primer_bind 3162..3178
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 3188..3206
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 3215..3322
/note="MCS"
/note="pBluescript multiple cloning site"
primer_bind 3239..3255
/note="SK primer"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
primer_bind complement(3289..3305)
/note="KS primer"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter complement(3335..3353)
/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
primer_bind complement(3374..3390)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3398..3414
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3422..3452)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3467..3488
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
CDS complement(3545..4234)
/codon_start=1
/note="Chl"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQFLCMRPIRKPPL
PARWPIH"
promoter complement(4235..4337)
/note="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
ORIGIN
1 ctcgggccgt ctcttgggct tgatcggcct tcttgcgcat ctcacgcgct cctgcggcgg
61 cctgtagggc aggctcatac ccctgccgaa ccgcttttgt cagccggtcg gccacggctt
121 ccggcgtctc aacgcgcttt gagattccca gcttttcggc caatccctgc ggtgcatagg
181 cgcgtggctc gaccgcttgc gggctgatgg tgacgtggcc cactggtggc cgctccaggg
241 cctcgtagaa cgcctgaatg cgcgtgtgac gtgccttgct gccctcgatg ccccgttgca
301 gccctagatc ggccacagcg gccgcaaacg tggtctggtc gcgggtcatc tgcgctttgt
361 tgccgatgaa ctccttggcc gacagcctgc cgtcctgcgt cagcggcacc acgaacgcgg
421 tcatgtgcgg gctggtttcg tcacggtgga tgctggccgt cacgatgcga tccgccccgt
481 acttgtccgc cagccacttg tgcgccttct cgaagaacgc cgcctgctgt tcttggctgg
541 ccgacttcca ccattccggg ctggccgtca tgacgtactc gaccgccaac acagcgtcct
601 tgcgccgctt ctctggcagc aactcgcgca gtcggcccat cgcttcatcg gtgctgctgg
661 ccgcccagtg ctcgttctct ggcgtcctgc tggcgtcagc gttgggcgtc tcgcgctcgc
721 ggtaggcgtg cttgagactg gccgccacgt tgcccatttt cgccagcttc ttgcatcgca
781 tgatcgcgta tgccgccatg cctgcccctc ccttttggtg tccaaccggc tcgacggggg
841 cagcgcaagg cggtgcctcc ggcgggccac tcaatgcttg agtatactca ctagactttg
901 cttcgcaaag tcgtgaccgc ctacggcggc tgcggcgccc tacgggcttg ctctccgggc
961 ttcgccctgc gcggtcgctg cgctcccttg ccagcccgtg gatatgtgga cgatggccgc
1021 gagcggccac cggctggctc gcttcgctcg gcccgtggac aaccctgctg gacaagctga
1081 tggacaggct gcgcctgccc acgagcttga ccacagggat tgcccaccgg ctacccagcc
1141 ttcgaccaca tacccaccgg ctccaactgc gcggcctgcg gccttgcccc atcaattttt
1201 ttaattttct ctggggaaaa gcctccggcc tgcggcctgc gcgcttcgct tgccggttgg
1261 acaccaagtg gaaggcgggt caaggctcgc gcagcgaccg cgcagcggct tggccttgac
1321 gcgcctggaa cgacccaagc ctatgcgagt gggggcagtc gaaggcgaag cccgcccgcc
1381 tgccccccga gcctcacggc ggcgagtgcg ggggttccaa gggggcagcg ccaccttggg
1441 caaggccgaa ggccgcgcag tcgatcaaca agccccggag gggccacttt ttgccggagg
1501 gggagccgcg ccgaaggcgt gggggaaccc cgcaggggtg cccttctttg ggcaccaaag
1561 aactagatat agggcgaaat gcgaaagact taaaaatcaa caacttaaaa aaggggggta
1621 cgcaacagct cattgcggca ccccccgcaa tagctcattg cgtaggttaa agaaaatctg
1681 taattgactg ccacttttac gcaacgcata attgttgtcg cgctgccgaa aagttgcagc
1741 tgattgcgca tggtgccgca accgtgcggc accctaccgc atggagataa gcatggccac
1801 gcagtccaga gaaatcggca ttcaagccaa gaacaagccc ggtcactggg tgcaaacgga
1861 acgcaaagcg catgaggcgt gggccgggct tattgcgagg aaacccacgg cggcaatgct
1921 gctgcatcac ctcgtggcgc agatgggcca ccagaacgcc gtggtggtca gccagaagac
1981 actttccaag ctcatcggac gttctttgcg gacggtccaa tacgcagtca aggacttggt
2041 ggccgagcgc tggatctccg tcgtgaagct caacggcccc ggcaccgtgt cggcctacgt
2101 ggtcaatgac cgcgtggcgt ggggccagcc ccgcgaccag ttgcgcctgt cggtgttcag
2161 tgccgccgtg gtggttgatc acgacgacca ggacgaatcg ctgttggggc atggcgacct
2221 gcgccgcatc ccgaccctgt atccgggcga gcagcaacta ccgaccggcc ccggcgagga
2281 gccgcccagc cagcccggca ttccgggcat ggaaccagac ctgccagcct tgaccgaaac
2341 ggaggaatgg gaacggcgcg ggcagcagcg cctgccgatg cccgatgagc cgtgttttct
2401 ggacgatggc gagccgttgg agccgccgac acgggtcacg ctgccgcgcc ggtagcactt
2461 gggttgcgca gcaacccgta agtgcgctgt tccagactat cggctgtagc cgcctcgccg
2521 ccctatacct tgtctgcctc cccgcgttgc gtcgcggtgc atggagccgg gccacctcga
2581 cctgaatgga agccggcggc acctcgctaa cggattcacc gtttttatca ggctctggga
2641 ggcagaataa atgatcatat cgtcaattat tacctccacg gggagagcct gagcaaactg
2701 gcctcaggca tttgagaagc acacggtcac actgcttccg gtagtcaata aaccggtaaa
2761 ccagcaatag acataagcgg ctatttaacg accctgccct gaaccgacga ccgggtcgaa
2821 tttgctttcg aatttctgcc attcatccgc ttattatcac ttattcaggc gtagcaccag
2881 gcgtttaagg gcaccaataa ctgccttaaa aaaattacgc cccgccctgc cactcatcgc
2941 agtcggccta ttggttaaaa aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg aattttaaca
3001 aaatattaac gcttacaatt tccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt gggaagggcg
3061 atcggtgcgg gcctcttcgc tattacgcca gctggcgaaa gggggatgtg ctgcaaggcg
3121 attaagttgg gtaacgccag ggttttccca gtcacgacgt tgtaaaacga cggccagtga
3181 gcgcgcgtaa tacgactcac tatagggcga attggagctc caccgcggtg gcggccgctc
3241 tagaactagt ggatcccccg ggctgcagga attcgatatc aagcttatcg ataccgtcga
3301 cctcgagggg gggcccggta cccagctttt gttcccttta gtgagggtta attgcgcgct
3361 tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac
3421 acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac
3481 tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc
3541 tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgcatgcata
3601 aaaactgttg taattcatta agcattctgc cgacatggaa gccatcacaa acggcatgat
3661 gaacctgaat cgccagcggc atcagcacct tgtcgccttg cgtataatat ttgcccatgg
3721 tgaaaacggg ggcgaagaag ttgtccatat tggccacgtt taaatcaaaa ctggtgaaac
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3901 cgtcgtggta ttcactccag agcgatgaaa acgtttcagt ttgctcatgg aaaacggtgt
3961 aacaagggtg aacactatcc catatcacca gctcaccgtc tttcattgcc atacggaatt
4021 ccggatgagc attcatcagg cgggcaagaa tgtgaataaa ggccggataa aacttgtgct
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4201 caacggtggt atatccagtg atttttttct ccattttagc ttccttagct cctgaaaatc
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4681 gaacgggctt caggcgctcc cgaaggt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pBBR1MCS-1广宿主表达质粒
别称: pBBR1MCS1
| 启动子: | Lac |
|---|---|
| 复制子: | pBBR1 |
| 质粒分类: | pBBR1MCS系列质粒 |
| 质粒大小: | 4707bp |
| 质粒标签: | LacZ |
| 原核抗性: | Chl |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 广宿主 |
| 培养条件: | 参考相关文献 |
| 5'测序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
| 3'测序引物: | M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT |
| 备注: | 低拷贝质粒 |
质粒属性
| 载体宿主： | 广宿主 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Chl |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-1是由Kovach等构建，已经证实可以在许多革兰氏阴性菌中进行复制[2]，包括Acetobacter xylinum、Alcaligenes eutrophus、Bartonella bacilliformis、百日咳杆菌（Bordetella spp.）、布鲁氏菌（Brucella spp.）、Caulobacter crescentus、大肠杆菌、Paracoccous denitrificans、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、恶臭假单胞菌（P. putida）、苜蓿根瘤菌（Rhizobium meliloti）、R. leguminosarum by. Viciae、球形红假单胞菌（Rhodobacter sphaeroides）、鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）、霍乱弧菌（Vibrio cholerae）和Xanthomonas campestris等。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4707 bp ds-DNA circular SYN 04-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBBR1MCS-1
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4707)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4707
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pBBR1 from Bordetella bronchiseptica; requires the pBBR1
Rep protein for replication"
CDS 1793..2455
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plasmid pBBR1 from Bordetella bronchiseptica"
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/note="SK primer"
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variants"
primer_bind complement(3289..3305)
/note="KS primer"
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variants"
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/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
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/note="M13 rev"
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variants"
protein_bind 3398..3414
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3422..3452)
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protein_bind 3467..3488
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of cAMP."
CDS complement(3545..4234)
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KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
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DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQFLCMRPIRKPPL
PARWPIH"
promoter complement(4235..4337)
/note="cat promoter"
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chloramphenicol acetyltransferase"
ORIGIN
1 ctcgggccgt ctcttgggct tgatcggcct tcttgcgcat ctcacgcgct cctgcggcgg
61 cctgtagggc aggctcatac ccctgccgaa ccgcttttgt cagccggtcg gccacggctt
121 ccggcgtctc aacgcgcttt gagattccca gcttttcggc caatccctgc ggtgcatagg
181 cgcgtggctc gaccgcttgc gggctgatgg tgacgtggcc cactggtggc cgctccaggg
241 cctcgtagaa cgcctgaatg cgcgtgtgac gtgccttgct gccctcgatg ccccgttgca
301 gccctagatc ggccacagcg gccgcaaacg tggtctggtc gcgggtcatc tgcgctttgt
361 tgccgatgaa ctccttggcc gacagcctgc cgtcctgcgt cagcggcacc acgaacgcgg
421 tcatgtgcgg gctggtttcg tcacggtgga tgctggccgt cacgatgcga tccgccccgt
481 acttgtccgc cagccacttg tgcgccttct cgaagaacgc cgcctgctgt tcttggctgg
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721 ggtaggcgtg cttgagactg gccgccacgt tgcccatttt cgccagcttc ttgcatcgca
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841 cagcgcaagg cggtgcctcc ggcgggccac tcaatgcttg agtatactca ctagactttg
901 cttcgcaaag tcgtgaccgc ctacggcggc tgcggcgccc tacgggcttg ctctccgggc
961 ttcgccctgc gcggtcgctg cgctcccttg ccagcccgtg gatatgtgga cgatggccgc
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1741 tgattgcgca tggtgccgca accgtgcggc accctaccgc atggagataa gcatggccac
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1861 acgcaaagcg catgaggcgt gggccgggct tattgcgagg aaacccacgg cggcaatgct
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2041 ggccgagcgc tggatctccg tcgtgaagct caacggcccc ggcaccgtgt cggcctacgt
2101 ggtcaatgac cgcgtggcgt ggggccagcc ccgcgaccag ttgcgcctgt cggtgttcag
2161 tgccgccgtg gtggttgatc acgacgacca ggacgaatcg ctgttggggc atggcgacct
2221 gcgccgcatc ccgaccctgt atccgggcga gcagcaacta ccgaccggcc ccggcgagga
2281 gccgcccagc cagcccggca ttccgggcat ggaaccagac ctgccagcct tgaccgaaac
2341 ggaggaatgg gaacggcgcg ggcagcagcg cctgccgatg cccgatgagc cgtgttttct
2401 ggacgatggc gagccgttgg agccgccgac acgggtcacg ctgccgcgcc ggtagcactt
2461 gggttgcgca gcaacccgta agtgcgctgt tccagactat cggctgtagc cgcctcgccg
2521 ccctatacct tgtctgcctc cccgcgttgc gtcgcggtgc atggagccgg gccacctcga
2581 cctgaatgga agccggcggc acctcgctaa cggattcacc gtttttatca ggctctggga
2641 ggcagaataa atgatcatat cgtcaattat tacctccacg gggagagcct gagcaaactg
2701 gcctcaggca tttgagaagc acacggtcac actgcttccg gtagtcaata aaccggtaaa
2761 ccagcaatag acataagcgg ctatttaacg accctgccct gaaccgacga ccgggtcgaa
2821 tttgctttcg aatttctgcc attcatccgc ttattatcac ttattcaggc gtagcaccag
2881 gcgtttaagg gcaccaataa ctgccttaaa aaaattacgc cccgccctgc cactcatcgc
2941 agtcggccta ttggttaaaa aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg aattttaaca
3001 aaatattaac gcttacaatt tccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt gggaagggcg
3061 atcggtgcgg gcctcttcgc tattacgcca gctggcgaaa gggggatgtg ctgcaaggcg
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3181 gcgcgcgtaa tacgactcac tatagggcga attggagctc caccgcggtg gcggccgctc
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3541 tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgcatgcata
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3661 gaacctgaat cgccagcggc atcagcacct tgtcgccttg cgtataatat ttgcccatgg
3721 tgaaaacggg ggcgaagaag ttgtccatat tggccacgtt taaatcaaaa ctggtgaaac
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3961 aacaagggtg aacactatcc catatcacca gctcaccgtc tttcattgcc atacggaatt
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4561 gctgggcctg tttctggcgc tggacttccc gctgttccgt cagcagcttt tcgcccacgg
4621 ccttgatgat cgcggcggcc ttggcctgca tatcccgatt caacggcccc agggcgtcca
4681 gaacgggctt caggcgctcc cgaaggt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2382/pSV40-Aldoa-m小鼠基因质粒 |
| P2383/pSV40-Ctsb-m小鼠基因质粒 |
| P2384/pSV40-Pkm-m小鼠基因质粒 |
| P2385/pSV40-Tcf25-m小鼠基因质粒 |
| P2424/pSV40-Mphosph8-m（1-1255bp）小鼠基因质粒 |
| P2425/pSV40-Pycrl-m（9-825bp）小鼠基因质粒 |
| P2426/pSV40-Pfkm-m（多了一段）小鼠基因质粒 |
| P2427/pSV40-Rbm5-m（1179-2448bp）小鼠基因质粒 |
| P2428/pSV40-App-m（742-2088bp）小鼠基因质粒 |
| P2429/pSV40-Fam20c-m小鼠基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Amp pBBR1MCS-1 广宿主质粒 Cam pBBR1MCS-2 广宿主质粒 Kan http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/U23751.1 pBBR1MCS-3 广宿主质粒
作为细胞生物学专业的博士生，在基因功能研究上已经有五年的经验了，今天我给大家讲讲其中经常用到并且非常重要的一种技术--慢病毒包装的过表达体系。下面我就从引物设计，慢病毒表达质粒构建等方面详细讲述。下面以 plex-MCS 载体为例。1. 选择酶切位点，为了避免移码突变，上游的酶切位点选择起始密码子 ATG 前面的 spel，下游选择 xho1。2. 构建方法的选择。连接法对于连接法，首先设计引物将目的基因 PCR 出来，即酶切位点加基因引物，此时应注意，为了防止酶切将基因破坏，通常习惯在两端
，TaKaRa，有木有；pGM-T，天根，有木有；一些表达载体，使用最广泛的，pET 系列，Novagen 公司（默克）的；有双 MCS 的 Duet 系列载体，Novagen 的；毕赤酵母表达质粒 pPIC3.5k，pPIC9k，pPICZA，pPICZaA 等等，都是 invitrogen 的；另外一些 pYES 酿酒酵母表达系统，也是 invitrogen 的，因此知道常见的质粒是哪个公司的，去他们公司网站上肯定可以找到该质粒的相关信息。在他们公司主页搜索栏直接搜索质粒名称，得到质粒序列，图谱什么的
pBBR1MCS-1广宿主表达质粒
￥100 - 1000
