- ￥1280
- Frdbio
- MCC1310
- 2025年08月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80
- 规格：
100ul*10
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 |
| MCC1310 | HB101感受态细胞 | 100μl*10 |
| pUC19（control vector） | 10pg/μl；10μl |
1.产品简介：
本产品是采用大肠杆菌HB101菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可有效抑制长片段末端重复区的重组，可用来制作 DNA 文库或重组质粒的亚克隆。
基因型：F- mcrB mrrhsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR)glnV44λ-
特点：1. HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的杂合产物（同时也是Stbl3的原始菌株）。2. recA13 突变可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率。3. 不含核酸酶 endA1 突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。4. hsdS20 背景使 HB101 缺失内切酶系统，增强了外源 DNA 的稳定性和提取质量。具链霉素抗性，不可用于蓝、白斑筛选。pUC19 质粒检测，转化效率可达108 cfu/μlDNA。
2. 使用说明：
1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养， 37℃培养12~16h。
3.注意事项：
1．感受态细胞处于冰水混合状态时立即插入冰上。
2．混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
*本试剂仅供实验室研究使用
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文献和实验Transformation of HB-101 Competent Cells
实验步骤 1. Thaw tubes of competent cells on ice, occasionally inverting gently to mix. 2. Pre-cool Falcon 2059 tubes on ice. 3. Aliquot 30 ul cells into each tube. 4. Add up to 10 ul DNA in TE or ligation
, 1ml 转至50 ml LB, 37oC 250 r/m至 A600=0.... 液氮或低温冰箱中取出的 大肠杆菌 *E.COLI DH5, JM109,HB101等,在LB平板上划线,37度过夜至长出单菌落.挑直径1-3毫米的单菌落*可多个, 接种到250毫升/3升锥形瓶 或80毫升/1升 锥形瓶 的SOC培养基. 培养基 量不可再多,会影响效率.在18度 150
观察到。 三．实验材料 受体菌：E.coli K12 HB101 质粒：pGLO plasmid 转化液（CaCl2） 氨苄青霉素（amp） 阿拉伯糖（ara） 培养基：固体LB、液体LB 接种环、移液器等 四．实验步骤 1. 准备平板： 每组：1块LB平板，2块LB/amp平板，1块LB/amp/ara平板 2. 准备感受态细胞：用250µl无菌水或转化液悬浮试剂盒中提供的大肠杆菌菌粉，此即感受态细胞
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