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- Frdbio
- MCC1410
- 2025年08月10日
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- 保存条件：
-80
- 规格：
100ul*10
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 |
| MCC1410 | Stable感受态细胞 | 100μl*10 |
| pUC19（control vector） | 10pg/μl；10μl |
1.产品简介：
本产品是采用大肠杆菌Stable菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，NEB公司开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株。
基因型：F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15e14- Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS -mcrBC)
特点：1.Stable菌株是NEB公司开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株，具有与Stbl2，Stbl3完全不同的基因型，但是表现出比Stbl2，Stbl3更优异的性能，特别适合慢病毒或具有末端重复序列DNA片段的克隆。2. 含有recA1 rel A1突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率。3.含有核酸酶endA1突变，避免提取质粒过程中核酸酶的污染，提高了提取病毒质粒的产量和质量。4.含有lacZΔM15，可用于蓝、白斑筛选。具四环素和链霉素抗性。pUC19检测，转化效率可达108 cfu/μl DNA。
2.使用说明：
1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养， 37℃培养12~16h。
3.注意事项：
1．对不稳定DNA片段的克隆或逆转录病毒/慢病毒载体的构建，涂板后平板应在30℃培养，以减少发生错误重组的概率。
2．制备高纯度病毒质粒时，应使用新鲜转化的平板接菌，新鲜菌液提取质粒，菌液不可低温保存后使用。
3．对不稳定的克隆或病毒质粒优先以质粒状态保存，尽量避免将质粒保存在大肠杆菌细胞中。
4．感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中10分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。
5．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
*本试剂仅供实验室研究使用
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