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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pAcGP67A
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pAcGP67A昆虫分泌质粒
别称: pAcGP67A
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 9761 bp ds-DNA circular SYN 26-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pAcGP67A
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 9761)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Friday, August 26, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..9761
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_recomb 3170..3997
/note="baculovirus recombination region (lef2/ORF603)"
/note="contains ORF603 and part of lef2"
CDS 3170..3294
/codon_start=3
/product="baculovirus late expression factor 2"
/note="lef2"
/translation="HLLIKSQDVYKPPNCQKMKTVDKLCPFAGNCKGLNPICNY"
CDS complement(3332..3937)
/codon_start=1
/product="baculovirus ORF603 protein"
/note="ORF603"
/translation="MAVIFNNKQLLADNSIEKGGELFLFNGSYNILESYVNPVLLKNGV
IELEEAAYYAGNILYKTDDPKFIDYINLIIKATHSEELPENSTVVNYRKTMRSGTIHPI
KKDIYIYDNKKFTLYDRYIYGYDNNYVNFYEEKNEKEKEYEEEDDKASSLCENKIILSQ
INCESFENDFKYYL-SDYNYAFSIIDNTTNVLVAFGLYR"
promoter 4001..4092
/gene="polh from Autographa californica"
/note="polyhedrin promoter"
/note="promoter for the baculovirus polyhedrin gene"
CDS 4189..4248
/codon_start=1
/gene="Autographa californica gp64"
/product="signal sequence from the baculovirus envelope
glycoprotein GP64"
/note="GP64 signal sequence"
/translation="MVSAIVLYVLLAAAAHSAFA"
misc_recomb 4776..5481
/note="baculovirus recombination region (ORF1629)"
/note="contains part of ORF1629"
3'UTR 4864..5236
/note="polyhedrin 3' UTR"
/note="3' UTR from the Autographa californica
nucleopolyhedrovirus polyhedrin gene (Suzuki et al., 2006)"
CDS complement(4893..5481)
/codon_start=2
/product="baculovirus capsid-associated protein"
/note="ORF1629"
/note="required for viral replication"
/translation="IPKSSTTNLIADVLADTINRRRVAMAKSSSEATSNDEGWDDDDNR
PNKANTPDVKYVQALFNVFTSSQLYTNDSDERNTKAHNILNDVEPLLQNKTQTNIDKAR
LLLQDLASFVALSENPLDSPAIGSEKQPLFETNRNLFYKSIEDLIFKFRYKDAENHLIF
ALTYHPKDYKFNELLKYVQQLSVNQQRTESSA"
CDS complement(5915..5932)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
primer_bind complement(7142..7158)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 7166..7182
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(7190..7220)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 7235..7256
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(7544..8132)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(8303..9163)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(9164..9268)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
primer_bind 9742..9758
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
ORIGIN
1 aagctttact cgtaaagcga gttgaaggat catatttagt tgcgtttatg agataagatt
61 gaaagcacgt gtaaaatgtt tcccgcgcgt tggcacaact atttacaatg cggccaagtt
121 ataaaagatt ctaatctgat atgttttaaa acacctttgc ggcccgagtt gtttgcgtac
181 gtgactagcg aagaagatgt gtggaccgca gaacagatag taaaacaaaa ccctagtatt
241 ggagcaataa tcgatttaac caacacgtct aaatattatg atggtgtgca ttttttgcgg
301 gcgggcctgt tatacaaaaa aattcaagta cctggccaga ctttgccgcc tgaaagcata
361 gttcaagaat ttattgacac ggtaaaagaa tttacagaaa agtgtcccgg catgttggtg
421 ggcgtgcact gcacacacgg tattaatcgc accggttaca tggtgtgcag atatttaatg
481 cacaccctgg gtattgcgcc gcaggaagcc atagatagat tcgaaaaagc cagaggtcac
541 aaaattgaaa gacaaaatta cgttcaagat ttattaattt aattaatatt atttgcattc
601 tttaacaaat actttatcct attttcaaat tgttgcgctt cttccagcga accaaaacta
661 tgcttcgctt gctccgttta gcttgtagcc gatcagtggc gttgttccaa tcgacggtag
721 gattaggccg gatattctcc accacaatgt tggcaacgtt gatgttacgt ttatgctttt
781 ggttttccac gtacgtcttt tggccggtaa tagccgtaaa cgtagtgccg tcgcgcgtca
841 cgcacaacac cggatgtttg cgcttgtccg cggggtattg aaccgcgcga tccgacaaat
901 ccaccacttt ggcaactaaa tcggtgacct gcgcgtcttt tttctgcatt atttcgtctt
961 tcttttgcat ggtttcctgg aagccggtgt acatgcggtt tagatcagtc atgacgcgcg
1021 tgacctgcaa atctttggcc tcgatctgct tgtccttgat ggcaacgatg cgttcaataa
1081 actcttgttt tttaacaagt tcctcggttt tttgcgccac caccgcttgc agcgcgtttg
1141 tgtgctcggt gaatgtcgca atcagcttag tcaccaactg tttgctctcc tcctcccgtt
1201 gtttgatcgc gggatcgtac ttgccggtgc agagcacttg aggaattact tcttctaaaa
1261 gccattcttg taattctatg gcgtaaggca atttggactt cataatcagc tgaatcacgc
1321 cggatttagt aatgagcact gtatgcggct gcaaatacag cgggtcgccc cttttcacga
1381 cgctgttaga ggtagggccc ccattttgga tggtctgctc aaataacgat ttgtatttat
1441 tgtctacatg aacacgtata gctttatcac aaactgtata ttttaaactg ttagcgacgt
1501 ccttggccac gaaccggacc tgttggtcgc gctctagcac gtaccgcagg ttgaacgtat
1561 cttctccaaa tttaaattct ccaattttaa cgcgagccat tttgatacac gtgtgtcgat
1621 tttgcaacaa ctattgtttt ttaacgcaaa ctaaacttat tgtggtaagc aataattaaa
1681 tatgggggaa catgcgccgc tacaacactc gtcgttatga acgcagacgg cgccggtctc
1741 ggcgcaagcg gctaaaacgt gttgcgcgtt caacgcggca aacatcgcaa aagccaatag
1801 tacagttttg atttgcatat taacggcgat tttttaaatt atcttattta ataaatagtt
1861 atgacgccta caactccccg cccgcgttga ctcgctgcac ctcgagcagt tcgttgacgc
1921 cttcctccgt gtggccgaac acgtcgagcg ggtggtcgat gaccagcggc gtgccgcacg
1981 cgacgcacaa gtatctgtac accgaatgat cgtcgggcga aggcacgtcg gcctccaagt
2041 ggcaatattg gcaaattcga aaatatatac agttgggttg tttgcgcata tctatcgtgg
2101 cgttgggcat gtacgtccga acgttgattt gcatgcaagc cgaaattaaa tcattgcgat
2161 tagtgcgatt aaaacgttgt acatcctcgc ttttaatcat gccgtcgatt aaatcgcgca
2221 atcgagtcaa gtgatcaaag tgtggaataa tgttttcttt gtattcccga gtcaagcgca
2281 gcgcgtattt taacaaacta gccatcttgt aagttagttt catttaatgc aactttatcc
2341 aataatatat tatgtatcgc acgtcaagaa ttaacaatgc gcccgttgtc gcatctcaac
2401 acgactatga tagagatcaa ataaagcgcg aattaaatag cttgcgacgc aacgtgcacg
2461 atctgtgcac gcgttccggc acgagctttg attgtaataa gtttttacga agcgatgaca
2521 tgacccccgt agtgacaacg atcacgccca aaagaactgc cgactacaaa attaccgagt
2581 atgtcggtga cgttaaaact attaagccat ccaatcgacc gttagtcgaa tcaggaccgc
2641 tggtgcgaga agccgcgaag tatggcgaat gcatcgtata acgtgtggag tccgctcatt
2701 agagcgtcat gtttagacaa gaaagctaca tatttaattg atcccgatga ttttattgat
2761 aaattgaccc taactccata cacggtattc tacaatggcg gggttttggt caaaatttcc
2821 ggactgcgat tgtacatgct gttaacggct ccgcccacta ttaatgaaat taaaaattcc
2881 aattttaaaa aacgcagcaa gagaaacatt tgtatgaaag aatgcgtaga aggaaagaaa
2941 aatgtcgtcg acatgctgaa caacaagatt aatatgcctc cgtgtataaa aaaaatattg
3001 aacgatttga aagaaaacaa tgtaccgcgc ggcggtatgt acaggaagag gtttatacta
3061 aactgttaca ttgcaaacgt ggtttcgtgt gccaagtgtg aaaaccgatg tttaatcaag
3121 gctctgacgc atttctacaa ccacgactcc aagtgtgtgg gtgaagtcat gcatctttta
3181 atcaaatccc aagatgtgta taaaccacca aactgccaaa aaatgaaaac tgtcgacaag
3241 ctctgtccgt ttgctggcaa ctgcaagggt ctcaatccta tttgtaatta ttgaataata
3301 aaacaattat aaatgctaaa tttgtttttt attaacgata caaaccaaac gcaacaagaa
3361 catttgtagt attatctata attgaaaacg cgtagttata atcgctgagg taatatttaa
3421 aatcattttc aaatgattca cagttaattt gcgacaatat aattttattt tcacataaac
3481 tagacgcctt gtcgtcttct tcttcgtatt ccttctcttt ttcatttttc tcctcataaa
3541 aattaacata gttattatcg tatccatata tgtatctatc gtatagagta aattttttgt
3601 tgtcataaat atatatgtct tttttaatgg ggtgtatagt accgctgcgc atagtttttc
3661 tgtaatttac aacagtgcta ttttctggta gttcttcgga gtgtgttgct ttaattatta
3721 aatttatata atcaatgaat ttgggatcgt cggttttgta caatatgttg ccggcatagt
3781 acgcagcttc ttctagttca attacaccat tttttagcag caccggatta acataacttt
3841 ccaaaatgtt gtacgaaccg ttaaacaaaa acagttcacc tcccttttct atactattgt
3901 ctgcgagcag ttgtttgttg ttaaaaataa cagccattgt aatgagacgc acaaactaat
3961 atcacaaact ggaaatgtct atcaatatat agttgctgat atcatggaga taattaaaat
4021 gataaccatc tcgcaaataa ataagtattt tactgttttc gtaacagttt tgtaataaaa
4081 aaacctataa atattccgga ttattcatac cgtcccacca tcgggcgcgg atctatgcta
4141 ctagtaaatc agtcacacca aggcttcaat aaggaacaca caagcaagat ggtaagcgct
4201 attgttttat atgtgctttt ggcggcggcg gcgcattctg cctttgcggc ggatcccggg
4261 taccttctag aattccggag cggccgctgc agatctgatc ctttcctggg acccggcaag
4321 aaccaaaaac tcactctctt caaggaaatc cgtaatgtta aacccgacac gatgaagctt
4381 gtcgttggat ggaaaggaaa agagttctac agggaaactt ggacccgctt catggaagac
4441 agcttcccca ttgttaacga ccaagaagtg atggatgttt tccttgttgt caacatgcgt
4501 cccactagac ccaaccgttg ttacaaattc ctggcccaac acgctctgcg ttgcgacccc
4561 gactatgtac ctcatgacgt gattaggatc gtcgagcctt catgggtggg cagcaacaac
4621 gagtaccgca tcagcctggc taagaagggc ggcggctgcc caataatgaa ccttcactct
4681 gagtacacca actcgttcga acagttcatc gatcgtgtca tctgggagaa cttctacaag
4741 cccatcgttt acatcggtac cgactctgct gaagaggagg aaattctcct tgaagtttcc
4801 ctggtgttca aagtaaagga gtttgcacca gacgcacctc tgttcactgg tccggcgtat
4861 taaaacacga tacattgtta ttagtacatt tattaagcgc tagattctgt gcgttgttga
4921 tttacagaca attgttgtac gtattttaat aattcattaa atttataatc tttagggtgg
4981 tatgttagag cgaaaatcaa atgattttca gcgtctttat atctgaattt aaatattaaa
5041 tcctcaatag atttgtaaaa taggtttcga ttagtttcaa acaagggttg tttttccgaa
5101 ccgatggctg gactatctaa tggattttcg ctcaacgcca caaaacttgc caaatcttgt
5161 agcagcaatc tagctttgtc gatattcgtt tgtgttttgt tttgtaataa aggttcgacg
5221 tcgttcaaaa tattatgcgc ttttgtattt ctttcatcac tgtcgttagt gtacaattga
5281 ctcgacgtaa acacgttaaa taaagcttgg acatatttaa catcgggcgt gttagcttta
5341 ttaggccgat tatcgtcgtc gtcccaaccc tcgtcgttag aagttgcttc cgaagacgat
5401 tttgccatag ccacacgacg cctattaatt gtgtcggcta acacgtccgc gatcaaattt
5461 gtagttgagc tttttggaat tatttctgat tgcgggcgtt tttgggcggg tttcaatcta
5521 actgtgcccg attttaattc agacaacacg ttagaaagcg atggtgcagg cggtggtaac
5581 atttcagacg gcaaatctac taatggcggc ggtggtggag ctgatgataa atctaccatc
5641 ggtggaggcg caggcggggc tggcggcgga ggcggaggcg gaggtggtgg cggtgatgca
5701 gacggcggtt taggctcaaa tgtctcttta ggcaacacag tcggcacctc aactattgta
5761 ctggtttcgg gcgccgtttt tggtttgacc ggtctgagac gagtgcgatt tttttcgttt
5821 ctaatagctt ccaacaattg ttgtctgtcg tctaaaggtg cagcgggttg aggttccgtc
5881 ggcattggtg gagcgggcgg caattcagac atcgatggtg gtggtggtgg tggaggcgct
5941 ggaatgttag gcacgggaga aggtggtggc ggcggtgccg ccggtataat ttgttctggt
6001 ttagtttgtt cgcgcacgat tgtgggcacc ggcgcaggcg ccgctggctg cacaacggaa
6061 ggtcgtctgc ttcgaggcag cgcttggggt ggtggcaatt caatattata attggaatac
6121 aaatcgtaaa aatctgctat aagcattgta atttcgctat cgtttaccgt gccgatattt
6181 aacaaccgct caatgtaagc aattgtattg taaagagatt gtctcaagct ccgcacgccg
6241 ataacaagcc ttttcatttt tactacagca ttgtagtggc gagacacttc gctgtcgtcg
6301 acgtacatgt atgctttgtt gtcaaaaacg tcgttggcaa gctttaaaat atttaaaaga
6361 acatctctgt tcagcaccac tgtgttgtcg taaatgttgt ttttgataat ttgcgcttcc
6421 gcagtatcga cacgttcaaa aaattgatgc gcatcaattt tgttgttcct attattgaat
6481 aaataagatt gtacagattc atatctacga ttcgtcatgg ccaccacaaa tgctacgctg
6541 caaacgctgg tacaatttta cgaaaactgc aaaaacgtca aaactcggta taaaataatc
6601 aacgggcgct ttggcaaaat atctatttta tcgcacaagc ccactagcaa attgtatttg
6661 cagaaaacaa tttcggcgca caattttaac gctgacgaaa taaaagttca ccagttaatg
6721 agcgaccacc caaattttat aaaaatctat tttaatcacg gttccatcaa caaccaagtg
6781 atcgtgatgg actacattga ctgtcccgat ttatttgaaa cactacaaat taaaggcgag
6841 ctttcgtacc aacttgttag caatattatt agacagctgt gtgaagcgct caacgatttg
6901 cacaagcaca atttcataca caacgacata aaactcgaaa atgtcttata tttcgaagca
6961 cttgatcgcg tgtatgtttg cgattacgga ttgtgcaaac acgaaaactc acttagcgtg
7021 cacgacggca cgttggagta ttttagtccg gaaaaaattc gacacacaac tatgcacgtt
7081 tcgtttgact ggtacgcggc gtgttaacat acaagttgct aaccggcggt tcgtaatcat
7141 ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag
7201 ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg
7261 cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa
7321 tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca
7381 ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg
7441 taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc
7501 agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc
7561 cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac
7621 tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc
7681 tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata
7741 gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc
7801 acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca
7861 acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag
7921 cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta
7981 gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg
8041 gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc
8101 agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt
8161 ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa
8221 ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat
8281 atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga
8341 tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac
8401 gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg
8461 ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg
8521 caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt
8581 cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct
8641 cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat
8701 cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta
8761 agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca
8821 tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat
8881 agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac
8941 atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa
9001 ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt
9061 cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg
9121 caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat
9181 attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt
9241 agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct
9301 aagaaaccat tattatcatg acattaacct ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc
9361 gtctcgcgcg tttcggtgat gacggtgaaa acctctgaca catgcagctc ccggagacgg
9421 tcacagcttg tctgtaagcg gatgccggga gcagacaagc ccgtcagggc gcgtcagcgg
9481 gtgttggcgg gtgtcggggc tggcttaact atgcggcatc agagcagatt gtactgagag
9541 tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc
9601 gccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt gggaagggcg atcggtgcgg gcctcttcgc
9661 tattacgcca gctggcgaaa gggggatgtg ctgcaaggcg attaagttgg gtaacgccag
9721 ggttttccca gtcacgacgt tgtaaaacga cggccagtgc c
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pAcGP67A昆虫分泌质粒
别称: pAcGP67A
| 启动子: | PH |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | polyhedrin 3 |
| 质粒分类: | 昆虫细胞载体；杆状病毒组成型分泌表达质粒 |
| 质粒大小: | 9761bp |
| 质粒标签: | N-GP67 signal |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 昆虫细胞 |
| 诱导方式: | 组成性表达，无需诱导 |
| 5'测序引物: | Polyhedrin-F：AAATGATAACCATCTCGC |
| 3'测序引物: | Polyhedrin-R：GTCCAAGTTTCCCTG |
| 备注: | 含有GP67分泌信号肽 |
质粒属性
| 载体宿主： | 昆虫细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 9761 bp ds-DNA circular SYN 26-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pAcGP67A
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 9761)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Friday, August 26, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..9761
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_recomb 3170..3997
/note="baculovirus recombination region (lef2/ORF603)"
/note="contains ORF603 and part of lef2"
CDS 3170..3294
/codon_start=3
/product="baculovirus late expression factor 2"
/note="lef2"
/translation="HLLIKSQDVYKPPNCQKMKTVDKLCPFAGNCKGLNPICNY"
CDS complement(3332..3937)
/codon_start=1
/product="baculovirus ORF603 protein"
/note="ORF603"
/translation="MAVIFNNKQLLADNSIEKGGELFLFNGSYNILESYVNPVLLKNGV
IELEEAAYYAGNILYKTDDPKFIDYINLIIKATHSEELPENSTVVNYRKTMRSGTIHPI
KKDIYIYDNKKFTLYDRYIYGYDNNYVNFYEEKNEKEKEYEEEDDKASSLCENKIILSQ
INCESFENDFKYYL-SDYNYAFSIIDNTTNVLVAFGLYR"
promoter 4001..4092
/gene="polh from Autographa californica"
/note="polyhedrin promoter"
/note="promoter for the baculovirus polyhedrin gene"
CDS 4189..4248
/codon_start=1
/gene="Autographa californica gp64"
/product="signal sequence from the baculovirus envelope
glycoprotein GP64"
/note="GP64 signal sequence"
/translation="MVSAIVLYVLLAAAAHSAFA"
misc_recomb 4776..5481
/note="baculovirus recombination region (ORF1629)"
/note="contains part of ORF1629"
3'UTR 4864..5236
/note="polyhedrin 3' UTR"
/note="3' UTR from the Autographa californica
nucleopolyhedrovirus polyhedrin gene (Suzuki et al., 2006)"
CDS complement(4893..5481)
/codon_start=2
/product="baculovirus capsid-associated protein"
/note="ORF1629"
/note="required for viral replication"
/translation="IPKSSTTNLIADVLADTINRRRVAMAKSSSEATSNDEGWDDDDNR
PNKANTPDVKYVQALFNVFTSSQLYTNDSDERNTKAHNILNDVEPLLQNKTQTNIDKAR
LLLQDLASFVALSENPLDSPAIGSEKQPLFETNRNLFYKSIEDLIFKFRYKDAENHLIF
ALTYHPKDYKFNELLKYVQQLSVNQQRTESSA"
CDS complement(5915..5932)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
primer_bind complement(7142..7158)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 7166..7182
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(7190..7220)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 7235..7256
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(7544..8132)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(8303..9163)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(9164..9268)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
primer_bind 9742..9758
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
ORIGIN
1 aagctttact cgtaaagcga gttgaaggat catatttagt tgcgtttatg agataagatt
61 gaaagcacgt gtaaaatgtt tcccgcgcgt tggcacaact atttacaatg cggccaagtt
121 ataaaagatt ctaatctgat atgttttaaa acacctttgc ggcccgagtt gtttgcgtac
181 gtgactagcg aagaagatgt gtggaccgca gaacagatag taaaacaaaa ccctagtatt
241 ggagcaataa tcgatttaac caacacgtct aaatattatg atggtgtgca ttttttgcgg
301 gcgggcctgt tatacaaaaa aattcaagta cctggccaga ctttgccgcc tgaaagcata
361 gttcaagaat ttattgacac ggtaaaagaa tttacagaaa agtgtcccgg catgttggtg
421 ggcgtgcact gcacacacgg tattaatcgc accggttaca tggtgtgcag atatttaatg
481 cacaccctgg gtattgcgcc gcaggaagcc atagatagat tcgaaaaagc cagaggtcac
541 aaaattgaaa gacaaaatta cgttcaagat ttattaattt aattaatatt atttgcattc
601 tttaacaaat actttatcct attttcaaat tgttgcgctt cttccagcga accaaaacta
661 tgcttcgctt gctccgttta gcttgtagcc gatcagtggc gttgttccaa tcgacggtag
721 gattaggccg gatattctcc accacaatgt tggcaacgtt gatgttacgt ttatgctttt
781 ggttttccac gtacgtcttt tggccggtaa tagccgtaaa cgtagtgccg tcgcgcgtca
841 cgcacaacac cggatgtttg cgcttgtccg cggggtattg aaccgcgcga tccgacaaat
901 ccaccacttt ggcaactaaa tcggtgacct gcgcgtcttt tttctgcatt atttcgtctt
961 tcttttgcat ggtttcctgg aagccggtgt acatgcggtt tagatcagtc atgacgcgcg
1021 tgacctgcaa atctttggcc tcgatctgct tgtccttgat ggcaacgatg cgttcaataa
1081 actcttgttt tttaacaagt tcctcggttt tttgcgccac caccgcttgc agcgcgtttg
1141 tgtgctcggt gaatgtcgca atcagcttag tcaccaactg tttgctctcc tcctcccgtt
1201 gtttgatcgc gggatcgtac ttgccggtgc agagcacttg aggaattact tcttctaaaa
1261 gccattcttg taattctatg gcgtaaggca atttggactt cataatcagc tgaatcacgc
1321 cggatttagt aatgagcact gtatgcggct gcaaatacag cgggtcgccc cttttcacga
1381 cgctgttaga ggtagggccc ccattttgga tggtctgctc aaataacgat ttgtatttat
1441 tgtctacatg aacacgtata gctttatcac aaactgtata ttttaaactg ttagcgacgt
1501 ccttggccac gaaccggacc tgttggtcgc gctctagcac gtaccgcagg ttgaacgtat
1561 cttctccaaa tttaaattct ccaattttaa cgcgagccat tttgatacac gtgtgtcgat
1621 tttgcaacaa ctattgtttt ttaacgcaaa ctaaacttat tgtggtaagc aataattaaa
1681 tatgggggaa catgcgccgc tacaacactc gtcgttatga acgcagacgg cgccggtctc
1741 ggcgcaagcg gctaaaacgt gttgcgcgtt caacgcggca aacatcgcaa aagccaatag
1801 tacagttttg atttgcatat taacggcgat tttttaaatt atcttattta ataaatagtt
1861 atgacgccta caactccccg cccgcgttga ctcgctgcac ctcgagcagt tcgttgacgc
1921 cttcctccgt gtggccgaac acgtcgagcg ggtggtcgat gaccagcggc gtgccgcacg
1981 cgacgcacaa gtatctgtac accgaatgat cgtcgggcga aggcacgtcg gcctccaagt
2041 ggcaatattg gcaaattcga aaatatatac agttgggttg tttgcgcata tctatcgtgg
2101 cgttgggcat gtacgtccga acgttgattt gcatgcaagc cgaaattaaa tcattgcgat
2161 tagtgcgatt aaaacgttgt acatcctcgc ttttaatcat gccgtcgatt aaatcgcgca
2221 atcgagtcaa gtgatcaaag tgtggaataa tgttttcttt gtattcccga gtcaagcgca
2281 gcgcgtattt taacaaacta gccatcttgt aagttagttt catttaatgc aactttatcc
2341 aataatatat tatgtatcgc acgtcaagaa ttaacaatgc gcccgttgtc gcatctcaac
2401 acgactatga tagagatcaa ataaagcgcg aattaaatag cttgcgacgc aacgtgcacg
2461 atctgtgcac gcgttccggc acgagctttg attgtaataa gtttttacga agcgatgaca
2521 tgacccccgt agtgacaacg atcacgccca aaagaactgc cgactacaaa attaccgagt
2581 atgtcggtga cgttaaaact attaagccat ccaatcgacc gttagtcgaa tcaggaccgc
2641 tggtgcgaga agccgcgaag tatggcgaat gcatcgtata acgtgtggag tccgctcatt
2701 agagcgtcat gtttagacaa gaaagctaca tatttaattg atcccgatga ttttattgat
2761 aaattgaccc taactccata cacggtattc tacaatggcg gggttttggt caaaatttcc
2821 ggactgcgat tgtacatgct gttaacggct ccgcccacta ttaatgaaat taaaaattcc
2881 aattttaaaa aacgcagcaa gagaaacatt tgtatgaaag aatgcgtaga aggaaagaaa
2941 aatgtcgtcg acatgctgaa caacaagatt aatatgcctc cgtgtataaa aaaaatattg
3001 aacgatttga aagaaaacaa tgtaccgcgc ggcggtatgt acaggaagag gtttatacta
3061 aactgttaca ttgcaaacgt ggtttcgtgt gccaagtgtg aaaaccgatg tttaatcaag
3121 gctctgacgc atttctacaa ccacgactcc aagtgtgtgg gtgaagtcat gcatctttta
3181 atcaaatccc aagatgtgta taaaccacca aactgccaaa aaatgaaaac tgtcgacaag
3241 ctctgtccgt ttgctggcaa ctgcaagggt ctcaatccta tttgtaatta ttgaataata
3301 aaacaattat aaatgctaaa tttgtttttt attaacgata caaaccaaac gcaacaagaa
3361 catttgtagt attatctata attgaaaacg cgtagttata atcgctgagg taatatttaa
3421 aatcattttc aaatgattca cagttaattt gcgacaatat aattttattt tcacataaac
3481 tagacgcctt gtcgtcttct tcttcgtatt ccttctcttt ttcatttttc tcctcataaa
3541 aattaacata gttattatcg tatccatata tgtatctatc gtatagagta aattttttgt
3601 tgtcataaat atatatgtct tttttaatgg ggtgtatagt accgctgcgc atagtttttc
3661 tgtaatttac aacagtgcta ttttctggta gttcttcgga gtgtgttgct ttaattatta
3721 aatttatata atcaatgaat ttgggatcgt cggttttgta caatatgttg ccggcatagt
3781 acgcagcttc ttctagttca attacaccat tttttagcag caccggatta acataacttt
3841 ccaaaatgtt gtacgaaccg ttaaacaaaa acagttcacc tcccttttct atactattgt
3901 ctgcgagcag ttgtttgttg ttaaaaataa cagccattgt aatgagacgc acaaactaat
3961 atcacaaact ggaaatgtct atcaatatat agttgctgat atcatggaga taattaaaat
4021 gataaccatc tcgcaaataa ataagtattt tactgttttc gtaacagttt tgtaataaaa
4081 aaacctataa atattccgga ttattcatac cgtcccacca tcgggcgcgg atctatgcta
4141 ctagtaaatc agtcacacca aggcttcaat aaggaacaca caagcaagat ggtaagcgct
4201 attgttttat atgtgctttt ggcggcggcg gcgcattctg cctttgcggc ggatcccggg
4261 taccttctag aattccggag cggccgctgc agatctgatc ctttcctggg acccggcaag
4321 aaccaaaaac tcactctctt caaggaaatc cgtaatgtta aacccgacac gatgaagctt
4381 gtcgttggat ggaaaggaaa agagttctac agggaaactt ggacccgctt catggaagac
4441 agcttcccca ttgttaacga ccaagaagtg atggatgttt tccttgttgt caacatgcgt
4501 cccactagac ccaaccgttg ttacaaattc ctggcccaac acgctctgcg ttgcgacccc
4561 gactatgtac ctcatgacgt gattaggatc gtcgagcctt catgggtggg cagcaacaac
4621 gagtaccgca tcagcctggc taagaagggc ggcggctgcc caataatgaa ccttcactct
4681 gagtacacca actcgttcga acagttcatc gatcgtgtca tctgggagaa cttctacaag
4741 cccatcgttt acatcggtac cgactctgct gaagaggagg aaattctcct tgaagtttcc
4801 ctggtgttca aagtaaagga gtttgcacca gacgcacctc tgttcactgg tccggcgtat
4861 taaaacacga tacattgtta ttagtacatt tattaagcgc tagattctgt gcgttgttga
4921 tttacagaca attgttgtac gtattttaat aattcattaa atttataatc tttagggtgg
4981 tatgttagag cgaaaatcaa atgattttca gcgtctttat atctgaattt aaatattaaa
5041 tcctcaatag atttgtaaaa taggtttcga ttagtttcaa acaagggttg tttttccgaa
5101 ccgatggctg gactatctaa tggattttcg ctcaacgcca caaaacttgc caaatcttgt
5161 agcagcaatc tagctttgtc gatattcgtt tgtgttttgt tttgtaataa aggttcgacg
5221 tcgttcaaaa tattatgcgc ttttgtattt ctttcatcac tgtcgttagt gtacaattga
5281 ctcgacgtaa acacgttaaa taaagcttgg acatatttaa catcgggcgt gttagcttta
5341 ttaggccgat tatcgtcgtc gtcccaaccc tcgtcgttag aagttgcttc cgaagacgat
5401 tttgccatag ccacacgacg cctattaatt gtgtcggcta acacgtccgc gatcaaattt
5461 gtagttgagc tttttggaat tatttctgat tgcgggcgtt tttgggcggg tttcaatcta
5521 actgtgcccg attttaattc agacaacacg ttagaaagcg atggtgcagg cggtggtaac
5581 atttcagacg gcaaatctac taatggcggc ggtggtggag ctgatgataa atctaccatc
5641 ggtggaggcg caggcggggc tggcggcgga ggcggaggcg gaggtggtgg cggtgatgca
5701 gacggcggtt taggctcaaa tgtctcttta ggcaacacag tcggcacctc aactattgta
5761 ctggtttcgg gcgccgtttt tggtttgacc ggtctgagac gagtgcgatt tttttcgttt
5821 ctaatagctt ccaacaattg ttgtctgtcg tctaaaggtg cagcgggttg aggttccgtc
5881 ggcattggtg gagcgggcgg caattcagac atcgatggtg gtggtggtgg tggaggcgct
5941 ggaatgttag gcacgggaga aggtggtggc ggcggtgccg ccggtataat ttgttctggt
6001 ttagtttgtt cgcgcacgat tgtgggcacc ggcgcaggcg ccgctggctg cacaacggaa
6061 ggtcgtctgc ttcgaggcag cgcttggggt ggtggcaatt caatattata attggaatac
6121 aaatcgtaaa aatctgctat aagcattgta atttcgctat cgtttaccgt gccgatattt
6181 aacaaccgct caatgtaagc aattgtattg taaagagatt gtctcaagct ccgcacgccg
6241 ataacaagcc ttttcatttt tactacagca ttgtagtggc gagacacttc gctgtcgtcg
6301 acgtacatgt atgctttgtt gtcaaaaacg tcgttggcaa gctttaaaat atttaaaaga
6361 acatctctgt tcagcaccac tgtgttgtcg taaatgttgt ttttgataat ttgcgcttcc
6421 gcagtatcga cacgttcaaa aaattgatgc gcatcaattt tgttgttcct attattgaat
6481 aaataagatt gtacagattc atatctacga ttcgtcatgg ccaccacaaa tgctacgctg
6541 caaacgctgg tacaatttta cgaaaactgc aaaaacgtca aaactcggta taaaataatc
6601 aacgggcgct ttggcaaaat atctatttta tcgcacaagc ccactagcaa attgtatttg
6661 cagaaaacaa tttcggcgca caattttaac gctgacgaaa taaaagttca ccagttaatg
6721 agcgaccacc caaattttat aaaaatctat tttaatcacg gttccatcaa caaccaagtg
6781 atcgtgatgg actacattga ctgtcccgat ttatttgaaa cactacaaat taaaggcgag
6841 ctttcgtacc aacttgttag caatattatt agacagctgt gtgaagcgct caacgatttg
6901 cacaagcaca atttcataca caacgacata aaactcgaaa atgtcttata tttcgaagca
6961 cttgatcgcg tgtatgtttg cgattacgga ttgtgcaaac acgaaaactc acttagcgtg
7021 cacgacggca cgttggagta ttttagtccg gaaaaaattc gacacacaac tatgcacgtt
7081 tcgtttgact ggtacgcggc gtgttaacat acaagttgct aaccggcggt tcgtaatcat
7141 ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag
7201 ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg
7261 cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa
7321 tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca
7381 ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg
7441 taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc
7501 agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc
7561 cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac
7621 tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc
7681 tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata
7741 gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc
7801 acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca
7861 acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag
7921 cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta
7981 gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg
8041 gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc
8101 agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt
8161 ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa
8221 ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat
8281 atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga
8341 tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac
8401 gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg
8461 ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg
8521 caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt
8581 cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct
8641 cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat
8701 cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta
8761 agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca
8821 tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat
8881 agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac
8941 atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa
9001 ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt
9061 cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg
9121 caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat
9181 attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt
9241 agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct
9301 aagaaaccat tattatcatg acattaacct ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc
9361 gtctcgcgcg tttcggtgat gacggtgaaa acctctgaca catgcagctc ccggagacgg
9421 tcacagcttg tctgtaagcg gatgccggga gcagacaagc ccgtcagggc gcgtcagcgg
9481 gtgttggcgg gtgtcggggc tggcttaact atgcggcatc agagcagatt gtactgagag
9541 tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc
9601 gccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt gggaagggcg atcggtgcgg gcctcttcgc
9661 tattacgcca gctggcgaaa gggggatgtg ctgcaaggcg attaagttgg gtaacgccag
9721 ggttttccca gtcacgacgt tgtaaaacga cggccagtgc c
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3903/pCMV-SPORT6-PEX26（1点突变）人源基因质粒 |
| P3904/pCMV-SPORT6-RRAS人源基因质粒 |
| P3905/pCMV-SPORT6-AQP3人源基因质粒 |
| P3906/pCMV-SPORT6-TMED3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3907/pCMV-SPORT6-TMEM184B人源基因质粒 |
| P3908/pCMV-SPORT6-CHST8人源基因质粒 |
| P3909/pCMV-SPORT6-ATP5IF1（2点突变）人源基因质粒 |
| P3910/pCMV-SPORT6-LYRM4（1点突变）人源基因质粒 |
| P3911/pCMV-SPORT6-ADIPOR1人源基因质粒 |
| P3912/pCMV-SPORT6-WSB2人源基因质粒 |
| P3913/pCMV-SPORT6-FEZ1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Nature：哈佛大学董民团队利用昆虫细胞全基因组 CRISPR 筛选，揭示杀虫毒素受体
了开创性的榜样。 作者主要研究的是一种来源于昆虫病原线虫肠道共生菌的细菌毒素 Tc toxin。这种毒素有着非同寻常的生态角色：这类细菌寄生在土壤中的特定线虫体内，这些线虫专门寻找并入侵到土壤中的昆虫幼虫体内，然后释放出这些细菌到昆虫体腔内，这些细菌再用分泌的毒素来抑制昆虫的免疫反应，然后细菌大量繁殖，线虫再以细菌为食物，繁殖下一代，最终杀死昆虫。1998 年 R H ffrench-Constant 组首次报道从昆虫病原线虫共生菌，发光光杆状菌 (Photorhabdus
（A. tumefaciens）。其致瘤特性是由Ti（tumor－inducing）质粒介导的。农杆根瘤菌之所以会感染植物根部是因为植物根部损伤部位分泌出酚类物质乙酰丁香酮和羟基乙酰丁香酮，这些酚类物质可以诱导Vir（Virulence region)基因的启动表达，Vir基因的产物将Ti质粒上的一段T－DNA 单链切下，而位于根瘤染色体上的操纵子基因产物则与单链T－DNA 结合，形成复合物，转化植物根部细胞。T－DNA 上有三套基因，其中两套基因分别控制合成植物生长素与分裂素，促使植物创伤组织无限制地生长与分裂，形成冠瘿
节肢动物某些昆虫的雌性成虫腹部末端的体表，或其他部位的腺体所分泌的一种低量、高效，能引诱同种异性昆虫前来交尾的化学物质。一般昆虫的性信息素都具有专一性，可直接散布空气中、水中或其他媒介物上，引起异性反应。过去用有机溶剂二氯甲烷（ CH2 Cl2 ）浸泡有关的昆虫分泌腺，提取性外激素，用来防治害虫。近年，科学家根据性信息素的化学结构（如舞毒蛾性信息素），已进行人工合成，用来作性引诱剂。在消灭农作物害虫的试验中，这类性信息素已取得很好的防治效果。舞毒蛾是一种森林害虫，它放出
pAcGP67A昆虫分泌质粒
￥100 - 1000
