- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P1353
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSG1729
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pSG1729枯草胞内质粒
别称: pSG1729
| 启动子: | xylose-inducible promoter |
|---|---|
| 复制子: | ColE1 ori |
| 质粒标签: | gfpmut1 |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Spe |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 枯草杆菌 |
质粒属性
| 载体宿主： | 枯草杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4418/pCMV-SPORT6-ZFAND2B人源基因质粒 |
| P4419/pCMV-SPORT6-ZNF3人源基因质粒 |
| P4420/pCMV-SPORT6-OSER1人源基因质粒 |
| P2102/pCMV-SPORT6-UCHL3人源基因质粒 |
| P4421/pCMV-SPORT6-EPCAM（点突变）人源基因质粒 |
| P4422/pCMV-SPORT6-EEF1A1人源基因质粒 |
| P4423/pCMV-SPORT6-RAB3D人源基因质粒 |
| P4424/pCMV-SPORT6-NAT1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4425/pCMV-SPORT6-ZFP36L1人源基因质粒 |
| P4426/pCMV-SPORT6-HYAL3（1点突变）人源基因质粒 |
| P4427/pCMV-SPORT6-HEATR1人源基因质粒 |
| P4428/pCMV-SPORT6-DCAF10（716-1680bp）人源基因质粒 |
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文献和实验Marburg遗传背景清楚，是研究枯草芽孢杆菌的标准菌株；AS1作为胞内表达的备用菌株，常用于表达外源蛋白。而胞外蛋白酶缺陷菌株WB800N能有效解决由于枯草芽孢杆菌丰富的蛋白酶导致的蛋白表达产物降解问题。 2 给力的表达载体 大部分的枯草芽孢杆菌不含内源性质粒，并且一般不能识别大肠杆菌中的启动子。最初的枯草芽孢杆菌载体源于金黄色葡萄球菌，其结构不稳定并易丢失。现在普遍使用的质粒载体是由枯草芽孢杆菌隐性质粒与大肠杆菌质粒构成的穿梭载体，可在大肠杆菌中完成基因片段的连接克隆
-OmpA 大肠杆菌质粒 Amp 带His标签和OmpA分泌信号肽 pTrc-CKS 大肠杆菌质粒 Amp 带His和CKS融合标签 pMBP-C 大肠杆菌质粒 Amp 胞内表达，His和MBP标签，带凝血酶位点
，提取基因组，mRNA逆转录。 我在研究生阶段只是涉及了前面两种比较常用的方式。其中，提取质粒建议使用omega或者maxgen这两种试剂盒进行提取。操作步骤按照说明书即可。 其中质粒提取，需要注意的点为 1 不宜加入过多的菌体，平均一个EP管最多加入2ml OD=3的离心菌体。最好是加入OD=2就可以了。OD不需要事先去测量，大致上通过肉眼估计一下即可。一般来讲2-4mlOD=2的菌体就足够你获得很浓的质粒了（假如是PET28a这种就需要多加一点，一般使用20ml。因为一个细胞内只有10
