pWB980枯草分泌质粒菌种

基本信息
名称：pWB980枯草分泌质粒菌种
别称: pWB980

启动子:	P43
质粒分类:	广宿主系列，枯草杆菌载体
质粒大小:	3787bp
原核抗性:	Kan
克隆菌株:	枯草杆菌
培养条件:	37度
表达宿主:	枯草芽孢杆菌
5'测序引物:	根据序列设计引物
3'测序引物:	根据序列设计引物

质粒属性

载体宿主：	枯草杆菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Kan
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
   pWB705 andpWB980 . pUB110 is the parental plasmid for pUB18 and its derivatives.pWB705  is a pUB18-based secretion vector carrying both the constitutive expressed P43 promoter and the engineered levansucrase signal sequence. pWB980 is a pUB19-based secretion vector. The transcription direction of the P43 promoter is the same as that for the majority of the pUB110-encoded genes. rep, kan, ble, mob and sacB SP represent thesequence coding for replicase, kanamycin resistance marker,bleomycin resistance marker, mobilization protein and the levansucrase signal sequence, respectively. The arrows show the transcription directions for these genes.
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3787 bp ds-DNA     circular SYN 29-AUG-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3787)
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Aug 29, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3787
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     CDS             309..1313
                     /codon_start=1
                     /gene="repB"
                     /product="RepB replication protein"
                     /label=repB
                     /note="from Enterococcus faecalis plasmid pAM-alpha-1"
                     /db_xref="GI:22652809"
                     /protein_id="AAN03827.1"
                     /translation="MGVSFNIMCPNSSIYSDEKSRVLVDKTKSGKVRPWREKKIANVDY
                     FELLHILEFKKAERVKDCAEILEYKQNRETGERKLYRVWFCKSRLCPMCNWRRAMKHGI
                     QSQKVVAEVIKQKPTVRWLFLTLTVKNVYDGEELNKSL-SD-MAQGFRRMMQYKKINKNLV
                     GFMRATEVTINNKDNSYNQHMHVLVCVEPTYFKNTENYVNQKQWIQFWKKAMKLDYDPN
                     VKVQMIRPKNKYKSDIQSAIDETAKYPVKDTDFMTDDEEKNLKRLS-DLEEGLHRKRLIS
                     YGGLLKEIHKKLNLDDTEEGDLIHTDDDEKADEDGFSIIAMWNWERKNYFIKE"
ORIGIN
        1 agaacctaaa aagaacgaat ttgaactaac tcataaccga gaggtaaaaa aagaacgaag
       61 tcgagatcag ggaatgagtt tataaaataa aaaaagcacc tgaaaaggtg tctttttttg
      121 atggttttga acttgttctt tcttatcttg atacatatag aaataacgtc atttttattt
      181 tagttgctga aaggtgcgtt gaagtgttgg tatgtatgtg ttttaaagta ttgaaaaccc
      241 ttaaaattgg ttgcacagaa aaaccccatc tgttaaagtt ataagtgact aaacaaataa
      301 ctaaatagat gggggtttct tttaatatta tgtgtcctaa tagtagcatt tattcagatg
      361 aaaaatcaag ggttttagtg gacaagacaa aaagtggaaa agtgagacca tggagagaaa
      421 agaaaatcgc taatgttgat tactttgaac ttctgcatat tcttgaattt aaaaaggctg
      481 aaagagtaaa agattgtgct gaaatattag agtataaaca aaatcgtgaa acaggcgaaa
      541 gaaagttgta tcgagtgtgg ttttgtaaat ccaggctttg tccaatgtgc aactggagga
      601 gagcaatgaa acatggcatt cagtcacaaa aggttgttgc tgaagttatt aaacaaaagc
      661 caacagttcg ttggttgttt ctcacattaa cagttaaaaa tgtttatgat ggcgaagaat
      721 taaataagag tttgtcagat atggctcaag gatttcgccg aatgatgcaa tataaaaaaa
      781 ttaataaaaa tcttgttggt tttatgcgtg caacggaagt gacaataaat aataaagata
      841 attcttataa tcagcacatg catgtattgg tatgtgtgga accaacttat tttaagaata
      901 cagaaaacta cgtgaatcaa aaacaatgga ttcaattttg gaaaaaggca atgaaattag
      961 actatgatcc aaatgtaaaa gttcaaatga ttcgaccgaa aaataaatat aaatcggata
     1021 tacaatcggc aattgacgaa actgcaaaat atcctgtaaa ggatacggat tttatgaccg
     1081 atgatgaaga aaagaatttg aaacgtttgt ctgatttgga ggaaggttta caccgtaaaa
     1141 ggttaatctc ctatggtggt ttgttaaaag aaatacataa aaaattaaac cttgatgaca
     1201 cagaagaagg cgatttgatt catacagatg atgacgaaaa agccgatgaa gatggatttt
     1261 ctattattgc aatgtggaat tgggaacgga aaaattattt tattaaagag tagttcaaca
     1321 aacgggccag tttgttgaag attagatgct ataattgtta ttaaaaggat tgaaggatgc
     1381 ttaggaagac gagttattaa tagctgaata agaacggtgc tctccaaata ttcttattta
     1441 gaaaagcaaa tctaaaatta tctgaaaagg gaatgagaat agtgaatgga ccaataataa
     1501 tgactagaga agaaagaatg aagattgttc atgaaattaa ggaacgaata ttggataaat
     1561 atggggatga tgttaaggct attggtgttt atggctctct tggtcgtcag actgatgggc
     1621 cctattcgga tattgagatg atgtgtgtca tgtcaacaga ggaagcagag ttcagccatg
     1681 aatggacaac cggtgagtgg aaggtggaag tgaattttga tagcgaagag attctactag
     1741 attatgcatc tcaggtggaa tcagattggc cgcttacaca tggtcaattt ttctctattt
     1801 tgccgattta tgattcaggt ggatacttag agaaagtgta tcaaactgct aaatcggtag
     1861 aagcccaaac gttccacgat gcgatttgtg cccttatcgt agaagagctg tttgaatatg
     1921 caggcaaatg gcgtaatatt cgtgtgcaag gaccgacaac atttctacca tccttgactg
     1981 tacaggtagc aatggcaggt gccatgttga ttggtctgca tcatcgcatc tgttatacga
     2041 cgagcgcttc ggtcttaact gaagcagtta agcaatcaga tcttccttca ggttatgacc
     2101 atctgtgcca gttcgtaatg tctggtcaac tttccgactc tgagaaactt ctggaatcgc
     2161 tagagaattt ctggaatggg attcaggagt ggacagaacg acacggatat atagtggatg
     2221 tgtcaaaacg cataccattt tgaacgatga cctctaataa ttgttaatca tgttggttac
     2281 gtatttatta acttctccta gtattagtaa ttatcatggc tgtcatggcg cattaacgga
     2341 ataaagggtg tgcttaaatc gggccatttt gcgtaataag aaaaaggatt aattatgagc
     2401 gaattgaatt aataataagg taatagattt acattagaaa atgaaagggg attttatgcg
     2461 tgagaatgtt acagtctatc ccggcattgc cagtcgggga tattaaaaag agtataggtt
     2521 tttattgcga taaactaggt ttcactttgg ttcaccatga agatggattc gcagttctaa
     2581 tgtgtaatga ggttcggatt catctatggg aggcaagtga tgaaggctgg cgctctcgta
     2641 gtaatgattc accggtttgt acaggtgcgg agtcgtttat tgctggtact gctagttgcc
     2701 gcattgaagt agagggaatt gatgaattat atcaacatat taagcctttg ggcattttgc
     2761 accccaatac atcattaaaa gatcagtggt gggatgaacg agactttgca gtaattgatc
     2821 ccgacaacaa tttgattagc ttttttcaac aaataaaaag ctaaaatcta ttattaatct
     2881 gttcagcaat cgggcgcgat tgctgaataa aagatacgag agacctctct tgtatctttt
     2941 ttattttgag tggttttgtc cgttacacta gaaaaccgaa agacaataaa aattttattc
     3001 ttgctgagtc tggctttcgg taagctagac aaaacggaca aaataaaaat tggcaagggt
     3061 ttaaaggtgg agattttttg agtgatcttc tcaaaaaata ctacctgtcc cttgctgatt
     3121 tttaaacgag cacgagagca aaacccccct ttgctgaggt ggcagagggc aggttttttt
     3181 gtttcttttt tctcgtaaaa aaaagaaagg tcttaaaggt tttatggttt tggtcggcac
     3241 tgaattcgag ctcagcatta ttgagtggat gattatattc cttttgatag gtggtatgtt
     3301 ttcgcttgaa cttttaaata cagccattga acatacggtt gatttaataa ctgacaaaca
     3361 tcaccctctt gctaaagcgg ccaaggacgc tgccgccggg gctgtttgcg tttttgccgt
     3421 gatttcgtgt atcattggtt tacttatttt tttgccaaag ctgtaatggc tgaaaattct
     3481 tacatttatt ttacattttt agaaatgggc gtgaaaaaaa gcgcgcgatt atgtaaaata
     3541 taaagtgata gcggtaccag gagggctgga agaagcagac cgctaacaca gtacataaaa
     3601 aaggagacat gaacgatgaa catcaaaaag tttgcaaaac aagcaacagt attaaccttt
     3661 actaccgcac tgctggcagg aggcgcaact caagcttttg cctcgagctc ggtacccggg
     3721 gatcctctag agtcgacctg caggcatgca agctagcttc agcacaattc caagaaagac
     3781 acgattt
//
 

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4690/pCMV-SPORT6-ACP6人源基因质粒

P4691/pCMV-SPORT6-PLEKHA5人源基因质粒

P4692/pCMV-SPORT6-NCOA4人源基因质粒

P4693/pCMV-SPORT6-PUF60人源基因质粒

P4694/pCMV-SPORT6-PQLC2人源基因质粒

P4695/pCMV-SPORT6-QARS人源基因质粒

P4696/pCMV-SPORT6-BRIX1人源基因质粒

P4697/pCMV-SPORT6-MTHFD2人源基因质粒

P4698/pCMV-SPORT6-DELE1人源基因质粒

P4699/pCMV-SPORT6-YBX1人源基因质粒

P4700/pCMV-SPORT6-DNASE1L1人源基因质粒

P4701/pCMV-SPORT6-DDX11人源基因质粒