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- Xybio
- 上海
- P0234
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pGADT7-Rec2
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pGADT7-Rec2酵母单杂交质粒
别称: pGADT7-Rec2
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pGADT7-Rec2酵母单杂交质粒
别称: pGADT7-Rec2
| 启动子: | ADH1 |
|---|---|
| 复制子: | 2U |
| 质粒分类: | 酵母系列，酵母单杂交载体 |
| 质粒大小: | 7.6kb |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | LEU2 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 酵母细胞 |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 杂交 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | LEU2 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2526/pENTR223-RPL36AL-T11C人源基因质粒 |
| P2527/pENTR223-SNX9-G267C人源基因质粒 |
| P2528/pENTR223-NDUFA5人源基因质粒 |
| P2529/pENTR223-NDUFV3人源基因质粒 |
| P2530/pENTR223-VAMP1-G13A人源基因质粒 |
| P2531/pENTR223-SUMO3人源基因质粒 |
| P2532/pENTR223-PLAC8人源基因质粒 |
| P2533/pENTR223-LOC116349人源基因质粒 |
| P2534/pENTR223-FILIP1L人源基因质粒 |
| P2535/pENTR223-KLHL14(1-1070bp)人源基因质粒 |
| P2536/pENTR223-CENPA人源基因质粒 |
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验相关实验
-Rec2-53和p53HIS2作为阳性对照以及pGADT7-Rec2-53和pHIS2作为阴性对照。 小结：酵母单杂交实验中cDNA文库筛，选择重组质粒的阳性克隆是关键点，实验室最常听说的就是BD 公司的Clontech。
luoqq1985 请问各位大侠，研究启动子，除了构建质粒，通过双报告基因检测之外，还可以做点哪方面的研究实验？如果要发文章，貌似只做点双报告基因很单调~~请各位指点，谢谢 gzctxin 不知道您想问的是技术方法问题还是科学内容的问题。方法上除了报告基因技术，还有启动子克隆、酵母单杂交法、噬菌体展示技术、DNA足迹法、DNA迁移率变动法等等。内容上有基因启动子的鉴定，启动子结合蛋白的鉴定，启动子在基因工程上的运用
tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒，用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白，但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控，也就是说有GLA4存在，这个质粒就表达绿色荧光蛋白，没有GLA4存在，就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整，但是我现在的问题是，转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒，进行调控？据说GLA4上有核定位元件，要是将这个核定位序列删除，可行吗？据说核内有很多的辅助因子，参与了蛋白
pGADT7-Rec2酵母单杂交质粒
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