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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
VPF;VEGF;MVCD1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pT7-His-VEGFA人源基因质粒
别称: VPF;VEGF;MVCD1
复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-VEGFA是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5725 bp ds-DNA circular SYN 28-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5725
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 276..719
/codon_start=1
/note="VEGFA"
/translation="MNFLLSWVHWSLALLLYLHHAKWSQAAPM-AEGGGQNHHEVVKFMD
VYQRSYCHPIETLVDIFQEYPDEIEYIFKPSCVPLMRCGGCCNDEGLECVPTEESNITM
QIMRIKPHQGQHIGEMSFLQHNKCECRPKKDRARQEKCDKPRR"
CDS 726..743
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 810..857
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 894..1349
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(1442..2257)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 2379..2967
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3397..3588)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(4397..5479)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(5480..5557)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccatgaa ctttctgctg tcttgggtgc
301 attggagcct tgccttgctg ctctacctcc accatgccaa gtggtcccag gctgcaccca
361 tggcagaagg aggagggcag aatcatcacg aagtggtgaa gttcatggat gtctatcagc
421 gcagctactg ccatccaatc gagaccctgg tggacatctt ccaggagtac cctgatgaga
481 tcgagtacat cttcaagcca tcctgtgtgc ccctgatgcg atgcgggggc tgctgcaatg
541 acgagggcct ggagtgtgtg cccactgagg agtccaacat caccatgcag attatgcgga
601 tcaaacctca ccaaggccag cacataggag agatgagctt cctacagcac aacaaatgtg
661 aatgcagacc aaagaaagat agagcaagac aagaaaaatg tgacaagccg aggcggtgac
721 tcgagcacca ccaccaccac cactgagatc cggctgctaa caaagcccga aaggaagctg
781 agttggctgc tgccaccgct gagcaataac tagcataacc ccttggggcc tctaaacggg
841 tcttgagggg ttttttgctg aaaggaggaa ctatatccgg attggcgaat gggacgcgcc
901 ctgtagcggc gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact
961 tgccagcgcc ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc
1021 cggctttccc cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt
1081 acggcacctc gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc
1141 ctgatagacg gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt
1201 gttccaaact ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat
1261 tttgccgatt tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa
1321 ttttaacaaa atattaacgt ttacaatttc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg
1381 aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgaattaatt
1441 cttagaaaaa ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca ggattatcaa
1501 taccatattt ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg aggcagttcc
1561 ataggatggc aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca tcaatacaac
1621 ctattaattt cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca tgagtgacga
1681 ctgaatccgg tgagaatggc aaaagtttat gcatttcttt ccagacttgt tcaacaggcc
1741 agccattacg ctcgtcatca aaatcactcg catcaaccaa accgttattc attcgtgatt
1801 gcgcctgagc gagacgaaat acgcgatcgc tgttaaaagg acaattacaa acaggaatcg
1861 aatgcaaccg gcgcaggaac actgccagcg catcaacaat attttcacct gaatcaggat
1921 attcttctaa tacctggaat gctgttttcc cggggatcgc agtggtgagt aaccatgcat
1981 catcaggagt acggataaaa tgcttgatgg tcggaagagg cataaattcc gtcagccagt
2041 ttagtctgac catctcatct gtaacatcat tggcaacgct acctttgcca tgtttcagaa
2101 acaactctgg cgcatcgggc ttcccataca atcgatagat tgtcgcacct gattgcccga
2161 cattatcgcg agcccattta tacccatata aatcagcatc catgttggaa tttaatcgcg
2221 gcctagagca agacgtttcc cgttgaatat ggctcataac accccttgta ttactgttta
2281 tgtaagcaga cagttttatt gttcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac
2341 tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc
2401 gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat
2461 caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat
2521 actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct
2581 acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt
2641 cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg
2701 gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta
2761 cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg
2821 gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg
2881 tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc
2941 tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg
3001 gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat
3061 aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc
3121 agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag cgcctgatgc ggtattttct ccttacgcat
3181 ctgtgcggta tttcacaccg catatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg
3241 catagttaag ccagtataca ctccgctatc gctacgtgac tgggtcatgg ctgcgccccg
3301 acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt ctgctcccgg catccgctta
3361 cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag aggttttcac cgtcatcacc
3421 gaaacgcgcg aggcagctgc ggtaaagctc atcagcgtgg tcgtgaagcg attcacagat
3481 gtctgcctgt tcatccgcgt ccagctcgtt gagtttctcc agaagcgtta atgtctggct
3541 tctgataaag cgggccatgt taagggcggt tttttcctgt ttggtcactg atgcctccgt
3601 gtaaggggga tttctgttca tgggggtaat gataccgatg aaacgagaga ggatgctcac
3661 gatacgggtt actgatgatg aacatgcccg gttactggaa cgttgtgagg gtaaacaact
3721 ggcggtatgg atgcggcggg accagagaaa aatcactcag ggtcaatgcc agcgcttcgt
3781 taatacagat gtaggtgttc cacagggtag ccagcagcat cctgcgatgc agatccggaa
3841 cataatggtg cagggcgctg acttccgcgt ttccagactt tacgaaacac ggaaaccgaa
3901 gaccattcat gttgttgctc aggtcgcaga cgttttgcag cagcagtcgc ttcacgttcg
3961 ctcgcgtatc ggtgattcat tctgctaacc agtaaggcaa ccccgccagc ctagccgggt
4021 cctcaacgac aggagcacga tcatgcgcac ccgtggggcc gccatgccgg cgataatggc
4081 ctgcttctcg ccgaaacgtt tggtggcggg accagtgacg aaggcttgag cgagggcgtg
4141 caagattccg aataccgcaa gcgacaggcc gatcatcgtc gcgctccagc gaaagcggtc
4201 ctcgccgaaa atgacccaga gcgctgccgg cacctgtcct acgagttgca tgataaagaa
4261 gacagtcata agtgcggcga cgatagtcat gccccgcgcc caccggaagg agctgactgg
4321 gttgaaggct ctcaagggca tcggtcgaga tcccggtgcc taatgagtga gctaacttac
4381 attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca
4441 ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgcc agggtggttt
4501 ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt caccgcctgg ccctgagaga
4561 gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg aaaatcctgt ttgatggtgg
4621 ttaacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc gtatcccact accgagatat
4681 ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat tgcgcccagc gccatctgat
4741 cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt cagcatttgc atggtttgtt
4801 gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc tatcggctga atttgattgc
4861 gagtgagata tttatgccag ccagccagac gcagacgcgc cgagacagaa cttaatgggc
4921 ccgctaacag cgcgatttgc tggtgaccca atgcgaccag atgctccacg cccagtcgcg
4981 taccgtcttc atgggagaaa ataatactgt tgatgggtgt ctggtcagag acatcaagaa
5041 ataacgccgg aacattagtg caggcagctt ccacagcaat ggcatcctgg tcatccagcg
5101 gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag attgtgcacc gccgctttac
5161 aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac gctggcaccc agttgatcgg
5221 cgcgagattt aatcgccgcg acaatttgcg acggcgcgtg cagggccaga ctggaggtgg
5281 caacgccaat cagcaacgac tgtttgcccg ccagttgttg tgccacgcgg ttgggaatgt
5341 aattcagctc cgccatcgcc gcttccactt tttcccgcgt tttcgcagaa acgtggctgg
5401 cctggttcac cacgcgggaa acggtctgat aagagacacc ggcatactct gcgacatcgt
5461 ataacgttac tggtttcaca ttcaccaccc tgaattgact ctcttccggg cgctatcatg
5521 ccataccgcg aaaggttttg cgccattcga tggtgtccgg gatctcgacg ctctccctta
5581 tgcgactcct gcattaggaa gcagcccagt agtaggttga ggccgttgag caccgccgcc
5641 gcaaggaatg gtgcatgcaa ggagatggcg cccaacagtc ccccggccac ggggcctgcc
5701 accataccca cgccgaaaca agcgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pT7-His-VEGFA人源基因质粒
别称: VPF;VEGF;MVCD1
| 启动子: | T7 |
|---|
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-VEGFA是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5725 bp ds-DNA circular SYN 28-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5725
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/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
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/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 2379..2967
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/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
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DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(4397..5479)
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/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(5480..5557)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccatgaa ctttctgctg tcttgggtgc
301 attggagcct tgccttgctg ctctacctcc accatgccaa gtggtcccag gctgcaccca
361 tggcagaagg aggagggcag aatcatcacg aagtggtgaa gttcatggat gtctatcagc
421 gcagctactg ccatccaatc gagaccctgg tggacatctt ccaggagtac cctgatgaga
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901 ctgtagcggc gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact
961 tgccagcgcc ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc
1021 cggctttccc cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt
1081 acggcacctc gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc
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1201 gttccaaact ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat
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1321 ttttaacaaa atattaacgt ttacaatttc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg
1381 aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgaattaatt
1441 cttagaaaaa ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca ggattatcaa
1501 taccatattt ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg aggcagttcc
1561 ataggatggc aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca tcaatacaac
1621 ctattaattt cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca tgagtgacga
1681 ctgaatccgg tgagaatggc aaaagtttat gcatttcttt ccagacttgt tcaacaggcc
1741 agccattacg ctcgtcatca aaatcactcg catcaaccaa accgttattc attcgtgatt
1801 gcgcctgagc gagacgaaat acgcgatcgc tgttaaaagg acaattacaa acaggaatcg
1861 aatgcaaccg gcgcaggaac actgccagcg catcaacaat attttcacct gaatcaggat
1921 attcttctaa tacctggaat gctgttttcc cggggatcgc agtggtgagt aaccatgcat
1981 catcaggagt acggataaaa tgcttgatgg tcggaagagg cataaattcc gtcagccagt
2041 ttagtctgac catctcatct gtaacatcat tggcaacgct acctttgcca tgtttcagaa
2101 acaactctgg cgcatcgggc ttcccataca atcgatagat tgtcgcacct gattgcccga
2161 cattatcgcg agcccattta tacccatata aatcagcatc catgttggaa tttaatcgcg
2221 gcctagagca agacgtttcc cgttgaatat ggctcataac accccttgta ttactgttta
2281 tgtaagcaga cagttttatt gttcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac
2341 tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc
2401 gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat
2461 caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat
2521 actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct
2581 acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt
2641 cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg
2701 gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta
2761 cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg
2821 gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg
2881 tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc
2941 tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg
3001 gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat
3061 aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc
3121 agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag cgcctgatgc ggtattttct ccttacgcat
3181 ctgtgcggta tttcacaccg catatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg
3241 catagttaag ccagtataca ctccgctatc gctacgtgac tgggtcatgg ctgcgccccg
3301 acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt ctgctcccgg catccgctta
3361 cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag aggttttcac cgtcatcacc
3421 gaaacgcgcg aggcagctgc ggtaaagctc atcagcgtgg tcgtgaagcg attcacagat
3481 gtctgcctgt tcatccgcgt ccagctcgtt gagtttctcc agaagcgtta atgtctggct
3541 tctgataaag cgggccatgt taagggcggt tttttcctgt ttggtcactg atgcctccgt
3601 gtaaggggga tttctgttca tgggggtaat gataccgatg aaacgagaga ggatgctcac
3661 gatacgggtt actgatgatg aacatgcccg gttactggaa cgttgtgagg gtaaacaact
3721 ggcggtatgg atgcggcggg accagagaaa aatcactcag ggtcaatgcc agcgcttcgt
3781 taatacagat gtaggtgttc cacagggtag ccagcagcat cctgcgatgc agatccggaa
3841 cataatggtg cagggcgctg acttccgcgt ttccagactt tacgaaacac ggaaaccgaa
3901 gaccattcat gttgttgctc aggtcgcaga cgttttgcag cagcagtcgc ttcacgttcg
3961 ctcgcgtatc ggtgattcat tctgctaacc agtaaggcaa ccccgccagc ctagccgggt
4021 cctcaacgac aggagcacga tcatgcgcac ccgtggggcc gccatgccgg cgataatggc
4081 ctgcttctcg ccgaaacgtt tggtggcggg accagtgacg aaggcttgag cgagggcgtg
4141 caagattccg aataccgcaa gcgacaggcc gatcatcgtc gcgctccagc gaaagcggtc
4201 ctcgccgaaa atgacccaga gcgctgccgg cacctgtcct acgagttgca tgataaagaa
4261 gacagtcata agtgcggcga cgatagtcat gccccgcgcc caccggaagg agctgactgg
4321 gttgaaggct ctcaagggca tcggtcgaga tcccggtgcc taatgagtga gctaacttac
4381 attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca
4441 ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgcc agggtggttt
4501 ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt caccgcctgg ccctgagaga
4561 gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg aaaatcctgt ttgatggtgg
4621 ttaacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc gtatcccact accgagatat
4681 ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat tgcgcccagc gccatctgat
4741 cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt cagcatttgc atggtttgtt
4801 gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc tatcggctga atttgattgc
4861 gagtgagata tttatgccag ccagccagac gcagacgcgc cgagacagaa cttaatgggc
4921 ccgctaacag cgcgatttgc tggtgaccca atgcgaccag atgctccacg cccagtcgcg
4981 taccgtcttc atgggagaaa ataatactgt tgatgggtgt ctggtcagag acatcaagaa
5041 ataacgccgg aacattagtg caggcagctt ccacagcaat ggcatcctgg tcatccagcg
5101 gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag attgtgcacc gccgctttac
5161 aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac gctggcaccc agttgatcgg
5221 cgcgagattt aatcgccgcg acaatttgcg acggcgcgtg cagggccaga ctggaggtgg
5281 caacgccaat cagcaacgac tgtttgcccg ccagttgttg tgccacgcgg ttgggaatgt
5341 aattcagctc cgccatcgcc gcttccactt tttcccgcgt tttcgcagaa acgtggctgg
5401 cctggttcac cacgcgggaa acggtctgat aagagacacc ggcatactct gcgacatcgt
5461 ataacgttac tggtttcaca ttcaccaccc tgaattgact ctcttccggg cgctatcatg
5521 ccataccgcg aaaggttttg cgccattcga tggtgtccgg gatctcgacg ctctccctta
5581 tgcgactcct gcattaggaa gcagcccagt agtaggttga ggccgttgag caccgccgcc
5641 gcaaggaatg gtgcatgcaa ggagatggcg cccaacagtc ccccggccac ggggcctgcc
5701 accataccca cgccgaaaca agcgc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1369/pEGFP-SMG5人源基因质粒 |
| P1370/pEGFP-TARBP2人源基因质粒 |
| P1377/pEGFP-DIS3人源基因质粒 |
| P1378/pEGFP-SAMD4A人源基因质粒 |
| P1379/pEGFP-DNMT3A人源基因质粒 |
| P1380/pEGFP-ARID5A人源基因质粒 |
| P1381/pEGFP-RC3H1人源基因质粒 |
| P1382/pEGFP-SMG6人源基因质粒 |
| P1389/pEGFP-RC3H2人源基因质粒 |
| P1392/pEGFP-SMG7人源基因质粒 |
| P1571/pEGFP-ADRB2人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
pT7-His-VEGFA人源基因质粒
￥100 - 1000
