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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pRS403
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pRS403酿酒酵母质粒
别称: pRS403
质粒属性
质粒简介
pRS4xx系列质粒被用于基因的穿梭载体克隆酿酒酵母，但能够在大肠杆菌中复制。虽然在大肠杆菌中，他们从pMB1的复制原点复制至pBR322。他们携带的bla（APR）标记用于选择用氨苄青霉素和复制的噬菌体F1原点单链DNA 。pRS403 through pRS406 are integrative plasmids (YIp); pRS413through pRS416 (shown below) are centromeric plasmids (YCp),and differ from the YIp by the insertion of a centromere (CEN)and autonomously replicating sequence (ARS); pRS423 throughpRS426 are episomal plasmids (YEp), and carry instead theorigin of replication from the yeast 2µ circle plasmid along withREP3 and FRT sequences (2). The 4 vectors in each series differonly in the yeast auxotrophic marker used: HIS3 (pRS4x3), TRP1(pRS4x4), LEU2 (pRS4x5) or URA3 (pRS4x6).
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4456 bp ds-DNA circular SYN 29-NOV-2013
DEFINITION Yeast integrative vector with a HIS3 marker and an MCS derived from
pBLUESCRIPT II.
ACCESSION U03443
KEYWORDS pRS403
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4456)
AUTHORS Sikorski RS, Hieter P.
TITLE A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for
efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae.
JOURNAL Genetics 1989;122:19-27.
PUBMED 2659436
REFERENCE 2 (bases 1 to 4456)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 12, 2016 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4456
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Saccharomyces cerevisiae"
/mol_type="other DNA"
promoter 317..503
/gene="S. cerevisiae HIS3"
/note="HIS3 promoter"
CDS 504..1163
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae HIS3"
/product="imidazoleglycerol-phosphate dehydratase, required
for histidine biosynthesis"
/note="HIS3"
/note="yeast auxotrophic marker"
/translation="MTEQKALVKRITNETKIQIAISLKGGPLAIEHSIFPEKEAEAVAE
QATQSQVINVHTGIGFLDHMIHALAKHSGWSLIVECIGDLHIDDHHTTEDCGIALGQAF
KEALLARGVKRFGSGFAPLDEALSRAVVDLSNRPYAVVELGLQREKVGDLSCEMIPHFL
ESFAEASRITLHVDCLRGKNDHHRSESAFKALAVAIREATSPNGTNDVPSTKGVLM"
rep_origin complement(1423..1878)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(1661..2239)
/codon_start=1
/gene="lacZ fragment"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/note="lacZ-alpha"
/translation="MTMITPSAQLTLTKGNKSWSSTAVAAALELVDPPGCRNSISSLSI
PSTSRGGPVPNSPYSESYYARSLAVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEAR
TDRPSQQLRSLNGEWRDAPCSGALSAAGVVVTRSVTATLASALAPAPFAFFPSFLATFA
GFPRQALNRGLPLGFRFSALRHLDPKKLD"
primer_bind 2023..2039
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 2049..2067
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 2076..2183
/note="MCS"
/note="pBluescript multiple cloning site"
promoter complement(2196..2214)
/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
primer_bind complement(2235..2251)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 2259..2275
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2283..2313)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
rep_origin complement(2637..3225)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3396..4256)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4257..4361)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
181 accataaatt cccgttttaa gagcttggtg agcgctagga gtcactgcca ggtatcgttt
241 gaacacggca ttagtcaggg aagtcataac acagtccttt cccgcaattt tctttttcta
301 ttactcttgg cctcctctag tacactctat atttttttat gcctcggtaa tgattttcat
361 tttttttttt cccctagcgg atgactcttt ttttttctta gcgattggca ttatcacata
421 atgaattata cattatataa agtaatgtga tttcttcgaa gaatatacta aaaaatgagc
481 aggcaagata aacgaaggca aagatgacag agcagaaagc cctagtaaag cgtattacaa
541 atgaaaccaa gattcagatt gcgatctctt taaagggtgg tcccctagcg atagagcact
601 cgatcttccc agaaaaagag gcagaagcag tagcagaaca ggccacacaa tcgcaagtga
661 ttaacgtcca cacaggtata gggtttctgg accatatgat acatgctctg gccaagcatt
721 ccggctggtc gctaatcgtt gagtgcattg gtgacttaca catagacgac catcacacca
781 ctgaagactg cgggattgct ctcggtcaag cttttaaaga ggccctactg gcgcgtggag
841 taaaaaggtt tggatcagga tttgcgcctt tggatgaggc actttccaga gcggtggtag
901 atctttcgaa caggccgtac gcagttgtcg aacttggttt gcaaagggag aaagtaggag
961 atctctcttg cgagatgatc ccgcattttc ttgaaagctt tgcagaggct agcagaatta
1021 ccctccacgt tgattgtctg cgaggcaaga atgatcatca ccgtagtgag agtgcgttca
1081 aggctcttgc ggttgccata agagaagcca cctcgcccaa tggtaccaac gatgttccct
1141 ccaccaaagg tgttcttatg tagtgacacc gattatttaa agctgcagca tacgatatat
1201 atacatgtgt atatatgtat acctatgaat gtcagtaagt atgtatacga acagtatgat
1261 actgaagatg acaaggtaat gcatcattct atacgtgtca ttctgaacga ggcgcgcttt
1321 ccttttttct ttttgctttt tctttttttt tctcttgaac tcgacggatc tatgcggtgt
1381 gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggaaattgta aacgttaata
1441 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg
1501 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc
1561 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa
1621 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt
1681 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac
1741 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta
1801 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg
1861 cgccgctaca gggcgcgtcg cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc
1921 gatcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc
1981 gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg
2041 agcgcgcgta atacgactca ctatagggcg aattgggtac cgggcccccc ctcgaggtcg
2101 acggtatcga taagcttgat atcgaattcc tgcagcccgg gggatccact agttctagag
2161 cggccgccac cgcggtggag ctccagcttt tgttcccttt agtgagggtt aattgcgcgc
2221 ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca
2281 cacaacatag gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg agtgaggtaa
2341 ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag
2401 ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc
2461 gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct
2521 cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg
2581 tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc
2641 cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga
2701 aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct
2761 cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg
2821 gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag
2881 ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat
2941 cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac
3001 aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac
3061 tacggctaca ctagaaggac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc
3121 ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt
3181 tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc
3241 ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg
3301 agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca
3361 atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca
3421 cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag
3481 ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac
3541 ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc
3601 agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct
3661 agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc
3721 gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg
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3901 tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag
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4381 ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc
4441 acgaggccct ttcgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pRS403酿酒酵母质粒
别称: pRS403
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 质粒分类: | 酵母系列质粒；酵母表达质粒；酿酒酵母质粒 |
| 质粒大小: | 4456bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | HIS3 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | YPH499，YPH500等酿酒酵母 |
| 培养条件: | 30℃，YPD，有氧 |
| 5'测序引物: | T7(TAATACGACTCACTATAGGG) |
| 3'测序引物: | M13R(CAGGAAACAGCTATGACC) |
质粒属性
| 载体宿主： | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | HIS3 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pRS4xx系列质粒被用于基因的穿梭载体克隆酿酒酵母，但能够在大肠杆菌中复制。虽然在大肠杆菌中，他们从pMB1的复制原点复制至pBR322。他们携带的bla（APR）标记用于选择用氨苄青霉素和复制的噬菌体F1原点单链DNA 。pRS403 through pRS406 are integrative plasmids (YIp); pRS413through pRS416 (shown below) are centromeric plasmids (YCp),and differ from the YIp by the insertion of a centromere (CEN)and autonomously replicating sequence (ARS); pRS423 throughpRS426 are episomal plasmids (YEp), and carry instead theorigin of replication from the yeast 2µ circle plasmid along withREP3 and FRT sequences (2). The 4 vectors in each series differonly in the yeast auxotrophic marker used: HIS3 (pRS4x3), TRP1(pRS4x4), LEU2 (pRS4x5) or URA3 (pRS4x6).
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4456 bp ds-DNA circular SYN 29-NOV-2013
DEFINITION Yeast integrative vector with a HIS3 marker and an MCS derived from
pBLUESCRIPT II.
ACCESSION U03443
KEYWORDS pRS403
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4456)
AUTHORS Sikorski RS, Hieter P.
TITLE A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for
efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae.
JOURNAL Genetics 1989;122:19-27.
PUBMED 2659436
REFERENCE 2 (bases 1 to 4456)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 12, 2016 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4456
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Saccharomyces cerevisiae"
/mol_type="other DNA"
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QATQSQVINVHTGIGFLDHMIHALAKHSGWSLIVECIGDLHIDDHHTTEDCGIALGQAF
KEALLARGVKRFGSGFAPLDEALSRAVVDLSNRPYAVVELGLQREKVGDLSCEMIPHFL
ESFAEASRITLHVDCLRGKNDHHRSESAFKALAVAIREATSPNGTNDVPSTKGVLM"
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variants"
promoter 2049..2067
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 2076..2183
/note="MCS"
/note="pBluescript multiple cloning site"
promoter complement(2196..2214)
/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
primer_bind complement(2235..2251)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 2259..2275
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2283..2313)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
rep_origin complement(2637..3225)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3396..4256)
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related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4257..4361)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
181 accataaatt cccgttttaa gagcttggtg agcgctagga gtcactgcca ggtatcgttt
241 gaacacggca ttagtcaggg aagtcataac acagtccttt cccgcaattt tctttttcta
301 ttactcttgg cctcctctag tacactctat atttttttat gcctcggtaa tgattttcat
361 tttttttttt cccctagcgg atgactcttt ttttttctta gcgattggca ttatcacata
421 atgaattata cattatataa agtaatgtga tttcttcgaa gaatatacta aaaaatgagc
481 aggcaagata aacgaaggca aagatgacag agcagaaagc cctagtaaag cgtattacaa
541 atgaaaccaa gattcagatt gcgatctctt taaagggtgg tcccctagcg atagagcact
601 cgatcttccc agaaaaagag gcagaagcag tagcagaaca ggccacacaa tcgcaagtga
661 ttaacgtcca cacaggtata gggtttctgg accatatgat acatgctctg gccaagcatt
721 ccggctggtc gctaatcgtt gagtgcattg gtgacttaca catagacgac catcacacca
781 ctgaagactg cgggattgct ctcggtcaag cttttaaaga ggccctactg gcgcgtggag
841 taaaaaggtt tggatcagga tttgcgcctt tggatgaggc actttccaga gcggtggtag
901 atctttcgaa caggccgtac gcagttgtcg aacttggttt gcaaagggag aaagtaggag
961 atctctcttg cgagatgatc ccgcattttc ttgaaagctt tgcagaggct agcagaatta
1021 ccctccacgt tgattgtctg cgaggcaaga atgatcatca ccgtagtgag agtgcgttca
1081 aggctcttgc ggttgccata agagaagcca cctcgcccaa tggtaccaac gatgttccct
1141 ccaccaaagg tgttcttatg tagtgacacc gattatttaa agctgcagca tacgatatat
1201 atacatgtgt atatatgtat acctatgaat gtcagtaagt atgtatacga acagtatgat
1261 actgaagatg acaaggtaat gcatcattct atacgtgtca ttctgaacga ggcgcgcttt
1321 ccttttttct ttttgctttt tctttttttt tctcttgaac tcgacggatc tatgcggtgt
1381 gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggaaattgta aacgttaata
1441 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg
1501 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc
1561 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa
1621 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt
1681 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac
1741 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta
1801 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg
1861 cgccgctaca gggcgcgtcg cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc
1921 gatcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc
1981 gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg
2041 agcgcgcgta atacgactca ctatagggcg aattgggtac cgggcccccc ctcgaggtcg
2101 acggtatcga taagcttgat atcgaattcc tgcagcccgg gggatccact agttctagag
2161 cggccgccac cgcggtggag ctccagcttt tgttcccttt agtgagggtt aattgcgcgc
2221 ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca
2281 cacaacatag gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg agtgaggtaa
2341 ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag
2401 ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc
2461 gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct
2521 cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg
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3721 gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg
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3841 gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat
3901 tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2028/pENTR223-SOD2人源基因质粒 |
| P2029/pENTR223-OSTalpha人源基因质粒 |
| P2030/pENTR223-RERG人源基因质粒 |
| P2031/pENTR223-CD69人源基因质粒 |
| P2032/pENTR223-DNAJB9人源基因质粒 |
| P2033/pENTR223-SLC26A1人源基因质粒 |
| P2034/pENTR223-ZNF22人源基因质粒 |
| P2035/pENTR223-FGFBP2人源基因质粒 |
| P2036/pENTR223-PRG2人源基因质粒 |
| P2037/pENTR223-ZNF672人源基因质粒 |
| P2038/pENTR223-TM2D3人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
了整合，传送http://www.91bio.com/carriers-website-to-find/），比如查找pRS类质粒图谱（注意，是一类质粒图谱，没关系，照样能找到），直接在搜索框输入pRS，可以看到，之类质粒一共有三十多个。 找到自己需要的质粒名称，点击进入，就可以看到质粒图谱了。 拿第一个质粒pRS413举例，如上图，质粒图谱是不是很难看，对，我也觉得很难看，没关系，看见view sequence了吗？点击进入，我们就得到该质粒图谱的序列了。 如何得到
方法一：使用 Vector NT 软件 invitrogen 公司的这款软件绝对是分子生物学虫子们的福音，要想对质粒图谱了解更直观，安装这款软件是非常必要的。这款软件的软件包里面会包括 invitrogen 公司的所有质粒图谱信息和其他比较常见和经典的质粒图谱。 方法二：查找质粒图谱的网站 1.Vector Database（addgene） 这个网站很页面很人性化，直入主题，以前叫做 lablife，现在网站做了整合，比如查找 pRS 类质粒图谱（注意
相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问：请教如何从酿酒酵母抽提质粒 ? 用胞壁松解酶处理以后，再用SDS处理，是否就可以破碎酵母了，因为是抽提质粒，不是抽基因组 DNA，可以不用蛋白酶K处理吗?请各位朋友提宝贵建议(不用玻璃珠破细胞)。我要尽可能把样品中的质粒都抽提出来，然后 REAL TIME PCR定量，好计算每个酵母细胞中的质粒拷贝数目。因为样品少，不能做SOUTHERN BOLT计算拷贝。谢谢
pRS403酿酒酵母质粒
￥100 - 1000
