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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
YEplac181
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:YEplac181酿酒酵母质粒
别称: YEplac181
| 复制子: | 2U |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | LEU2 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主: | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途: | 蛋白表达 |
| 基因种属: | |
| 基因类型: | ORF |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | LEU2 |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
YEplac181是一个酿酒酵母表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5741 bp ds-DNA circular SYN 21-DEC-2017
DEFINITION Yeast episomal plasmid with a LEU2 marker.
COMMENT The sequence of this plasmid was reconstructed using the description
from Gietz and Sugino.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5741
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Saccharomyces cerevisiae"
/mol_type="other DNA"
promoter 142..172
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 180..196
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 216..500
/codon_start=1
/gene="lacZ"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/label=lacZ-alpha
/translation="MTMITPSLHACRSTLEDPRVPSSNSLAVVLQRRDWENPGVTQLNR
LAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRLMRYFLLTHLCGISHRI"
misc_feature 233..289
/label=MCS
/note="pUC19 multiple cloning site"
rep_origin 745..2091
/label=2u ori
/note="yeast 2u plasmid origin of replication"
CDS complement(2227..3321)
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae LEU2"
/product="3-isopropylmalate dehydrogenase, required for
leucine biosynthesis"
/label=LEU2
/note="yeast auxotrophic marker"
/translation="MSAPKKIVVLPGDHVGQEITAEAIKVLKAISDVRSNVKFDFENHL
IGGAAIDATGVPLPDEALEASKKVDAVLLGAVGGPKWGTGSVRPEQGLLKIRKELQLYA
NLRPCNFASDSLLDLSPIKPQFAKGTDFVVVRELVGGIYFGKRKEDDGDGVAWDSEQYT
VPEVQRITRMAAFMALQHEPPLPIWSLDKANVLASSRLWRKTVEETIKNEFPTLKVQHQ
LIDSAAMILVKNPTHLNGIIITSNMFGDIISDEASVIPGSLGLLPSASLASLPDKNTAF
GLYEPCHGSAPDLPKNKVNPIATILSAAMMLKLSLNLPEEGKAIEDAVKKVLDAGIRTG
DLGGSNSTTEVGDAVAEEVKKILA"
promoter complement(3322..3729)
/gene="S. cerevisiae LEU2"
/label=LEU2 promoter
promoter 3835..3939
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 3940..4800
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 4971..5559
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca
61 cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct
121 cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat
181 tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac catgattacg ccaagcttgc
241 atgcctgcag gtcgactcta gaggatcccc gggtaccgag ctcgaattca ctggccgtcg
301 ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca acttaatcgc cttgcagcac
361 atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg caccgatcgc ccttcccaac
421 agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt
481 gcggtatttc acaccgcata tatcggatcg tacttgttac ccatcattga attttgaaca
541 tccgaacctg ggagttttcc ctgaaacaga tagtatattt gaacctgtat aataatatat
601 agtctagcgc tttacggaag acaatgtatg tatttcggtt cctggagaaa ctattgcatc
661 tattgcatag gtaatcttgc acgtcgcatc cccggttcat tttctgcgtt tccatcttgc
721 acttcaatag catatctttg ttaacgaagc atctgtgctt cattttgtag aacaaaaatg
781 caacgcgaga gcgctaattt ttcaaacaaa gaatctgagc tgcattttta cagaacagaa
841 atgcaacgcg aaagcgctat tttaccaacg aagaatctgt gcttcatttt tgtaaaacaa
901 aaatgcaacg cgagagcgct aatttttcaa acaaagaatc tgagctgcat ttttacagaa
961 cagaaatgca acgcgagagc gctattttac caacaaagaa tctatacttc ttttttgttc
1021 tacaaaaatg catcccgaga gcgctatttt tctaacaaag catcttagat tacttttttt
1081 ctcctttgtg cgctctataa tgcagtctct tgataacttt ttgcactgta ggtccgttaa
1141 ggttagaaga aggctacttt ggtgtctatt ttctcttcca taaaaaaagc ctgactccac
1201 ttcccgcgtt tactgattac tagcgaagct gcgggtgcat tttttcaaga taaaggcatc
1261 cccgattata ttctataccg atgtggattg cgcatacttt gtgaacagaa agtgatagcg
1321 ttgatgattc ttcattggtc agaaaattat gaacggtttc ttctattttg tctctatata
1381 ctacgtatag gaaatgttta cattttcgta ttgttttcga ttcactctat gaatagttct
1441 tactacaatt tttttgtcta aagagtaata ctagagataa acataaaaaa tgtagaggtc
1501 gagtttagat gcaagttcaa ggagcgaaag gtggatgggt aggttatata gggatatagc
1561 acagagatat atagcaaaga gatacttttg agcaatgttt gtggaagcgg tattcgcaat
1621 attttagtag ctcgttacag tccggtgcgt ttttggtttt ttgaaagtgc gtcttcagag
1681 cgcttttggt tttcaaaagc gctctgaagt tcctatactt tctagctaga gaataggaac
1741 ttcggaatag gaacttcaaa gcgtttccga aaacgagcgc ttccgaaaat gcaacgcgag
1801 ctgcgcacat acagctcact gttcacgtcg cacctatatc tgcgtgttgc ctgtatatat
1861 atatacatga gaagaacggc atagtgcgtg tttatgctta aatgcgtact tatatgcgtc
1921 tatttatgta ggatgaaagg tagtctagta cctcctgtga tattatccca ttccatgcgg
1981 ggtatcgtat gcttccttca gcactaccct ttagctgttc tatatgctgc cactcctcaa
2041 ttggattagt ctcatccttc aatgctatca tttcctttga tattggatcg atccgatgat
2101 aagctgtcaa acatgagaat taattctacc ctatgaacat attccatttt gtaatttcgt
2161 gtcgtttcta ttatgaattt catttataaa gtttatgtac aaatatcata aaaaaagaga
2221 atctttttaa gcaaggattt tcttaacttc ttcggcgaca gcatcaccga cttccgtggt
2281 actgttggaa ccacctaaat caccagttct gatacctgca tccaaaacct ttttaactgc
2341 atcttcaatg gccttacctt cttcaggcaa gttcaatgac aatttcaaca tcattgcagc
2401 agacaagata gtggcgatag ggttgacctt attctttggc aaatctggag cagaaccgtg
2461 gcatggttcg tacaaaccaa atgcggtgtt cttgtctggc aaagaggcca aggacgcaga
2521 tggcaacaaa cccaaggaac ctgggataac ggaggcttca tcggagatga tatcaccaaa
2581 catgttgctg gtgattataa taccatttag gtgggttggg ttcttaacta ggatcatggc
2641 ggcagaatca atcaattgat gttgaacctt caatgtagga aattcgttct tgatggtttc
2701 ctccacagtt tttctccata atcttgaaga ggccaaaaca ttagctttat ccaaggacca
2761 aataggcaat ggtggctcat gttgtagggc catgaaagcg gccattcttg tgattctttg
2821 cacttctgga acggtgtatt gttcactatc ccaagcgaca ccatcaccat cgtcttcctt
2881 tctcttacca aagtaaatac ctcccactaa ttctctgaca acaacgaagt cagtaccttt
2941 agcaaattgt ggcttgattg gagataagtc taaaagagag tcggatgcaa agttacatgg
3001 tcttaagttg gcgtacaatt gaagttcttt acggattttt agtaaacctt gttcaggtct
3061 aacactacct gtaccccatt taggaccacc cacagcacct aacaaaacgg catcaacctt
3121 cttggaggct tccagcgcct catctggaag tgggacacct gtagcatcga tagcagcacc
3181 accaattaaa tgattttcga aatcgaactt gacattggaa cgaacatcag aaatagcttt
3241 aagaacctta atggcttcgg ctgtgatttc ttgaccaacg tggtcacctg gcaaaacgac
3301 gatcttctta ggggcagaca ttagaatggt atatccttga aatatatata tatatattgc
3361 tgaaatgtaa aaggtaagaa aagttagaaa gtaagacgat tgctaaccac ctattggaaa
3421 aaacaatagg tccttaaata atattgtcaa cttcaagtat tgtgatgcaa gcatttagtc
3481 atgaacgctt ctctattcta tatgaaaagc cggttccgcg gctctcacct ttcctttttc
3541 tcccaatttt tcagttgaaa aaggtatatg cgtcaggcga cctctgaaat taacaaaaaa
3601 tttccagtca tcgaatttga ttctgtgcga tagcgcccct gtgtgttctc gttatgttga
3661 ggaaaaaaat aatggttgct aagagattcg aactcttgca tcttacgata cctgagtatt
3721 cccacagtta attcttgaag acgaaagggc ctcgtgatac gcctattttt ataggttaat
3781 gtcatgataa taatggtttc ttagacgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga
3841 acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa
3901 ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta tgagtattca acatttccgt
3961 gtcgccctta ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca cccagaaacg
4021 ctggtgaaag taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta catcgaactg
4081 gatctcaaca gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt tccaatgatg
4141 agcactttta aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc gtattgacgc cgggcaagag
4201 caactcggtc gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc accagtcaca
4261 gaaaagcatc ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc cataaccatg
4321 agtgataaca ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa ggagctaacc
4381 gcttttttgc acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga accggagctg
4441 aatgaagcca taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat ggcaacaacg
4501 ttgcgcaaac tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca attaatagac
4561 tggatggagg cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc ggctggctgg
4621 tttattgctg ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat tgcagcactg
4681 gggccagatg gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag tcaggcaact
4741 atggatgaac gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa gcattggtaa
4801 ctgtcagacc aagtttactc atatatactt tagattgatt taaaacttca tttttaattt
4861 aaaaggatct aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag
4921 ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct
4981 ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt
5041 tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg
5101 cagataccaa atactgttct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct
5161 gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc
5221 gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg
5281 tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa
5341 ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg
5401 gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg
5461 ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga
5521 tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt
5581 ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct
5641 gattctgtgg ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga
5701 acgaccgagc gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag a
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P0628/pENTR223-EGFlAM人源基因质粒 |
| P1186/pENTR223-RBM4人源基因质粒 |
| P1203/pENTR223-OSBPL2人源基因质粒 |
| P0616/pENTR223-DRD2人源基因质粒 |
| P0617/pENTR223-DRD3人源基因质粒 |
| P0605/pENTR223-LTF人源基因质粒 |
| P0608/pENTR223-REN人源基因质粒 |
| P0631/pENTR223-HLA-B人源基因质粒 |
| P1776/pENTR223-TMEM234-G139C人源基因质粒 |
| P1777/pENTR223-LINC00051人源基因质粒 |
| P1778/pENTR223-IWS1人源基因质粒 |
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
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0:00 酿酒酵母子囊解剖0 0:21 订阅内容21 0:45 内容简介45 1:15 构建二倍体菌种75 3:01 孢子形成和子囊消化181 4:57 解剖子囊297 8:56 合子再定位536 11:08 代表性结果668 12:14 结论734 本视频来源于网络,如有异议请联系我们,我们将在5个工作日内作出处理。
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