- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P2938
- 2025年07月12日
9 年钻石会员
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
TP53
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCDNA3.1-P53-DB-GST人源基因质粒
别称: TP53
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-P53-DB-GST人源基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6678 bp ds-DNA circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pCDNA3.1-P53-DB-GST
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6678)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6678
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 202..581
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 893..1498
/note="P53-DB"
CDS 1538..2194
/codon_start=1
/product="glutathione S-transferase from Schistosoma
japonicum"
/note="GST"
/translation="MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKK
FELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRY
GVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVL
YMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK"
polyA_signal 2245..2469
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 2515..2943
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2957..3286
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3137..3272
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3353..4147
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4321..4442
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4893..5478)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5649..6509)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6510..6614)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttgccacca tgccttccca
901 gaaaacctac cagggcagct acggtttccg tctgggcttc ttgcattctg ggacagccaa
961 gtctgtgact tgcacgtact cccctgccct caacaagatg ttttgccaac tggccaagac
1021 ctgccctgtg cagctgtggg ttgattccac acccccgccc ggcacccgcg tccgcgccat
1081 ggccatctac aagcagtcac agcacatgac ggaggttgtg aggcgctgcc cccaccatga
1141 gcgctgctca gatagcgatg gtctggcccc tcctcagcat cttatccgag tggaaggaaa
1201 tttgcgtgtg gagtatttgg atgacagaaa cacttttcga catagtgtgg tggtgcccta
1261 tgagccgcct gaggttggct ctgactgtac caccatccac tacaactaca tgtgtaacag
1321 ttcctgcatg ggcggcatga accggaggcc catcctcacc atcatcacac tggaagactc
1381 cagtggtaat ctactgggac ggaacagctt tgaggtgcgt gtttgtgcct gtcctgggag
1441 agaccggcgc acagaggaag agaatctccg caagaaaggg gagcctcacc acgagctggg
1501 atccactagt ccagtgtggt ggaattctgc agatatcatg tcccctatac taggttattg
1561 gaaaattaag ggccttgtgc aacccactcg acttcttttg gaatatcttg aagaaaaata
1621 tgaagagcat ttgtatgagc gcgatgaagg tgataaatgg cgaaacaaaa agtttgaatt
1681 gggtttggag tttcccaatc ttccttatta tattgatggt gatgttaaat taacacagtc
1741 tatggccatc atacgttata tagctgacaa gcacaacatg ttgggtggtt gtccaaaaga
1801 gcgtgcagag atttcaatgc ttgaaggagc ggttttggat attagatacg gtgtttcgag
1861 aattgcatat agtaaagact ttgaaactct caaagttgat tttcttagca agctacctga
1921 aatgctgaaa atgttcgaag atcgtttatg tcataaaaca tatttaaatg gtgatcatgt
1981 aacccatcct gacttcatgt tgtatgacgc tcttgatgtt gttttataca tggacccaat
2041 gtgcctggat gcgttcccaa aattagtttg ttttaaaaaa cgtattgaag ctatcccaca
2101 aattgataag tacttgaaat ccagcaagta tatagcatgg cctttgcagg gctggcaagc
2161 cacgtttggt ggtggcgacc atcctccaaa atgagcggcc gctcgagtct agagggcccg
2221 tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct gttgtttgcc
2281 cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt tcctaataaa
2341 atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg ggtggggtgg
2401 ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg gatgcggtgg
2461 gctctatggc ttctgaggcg gaaagaacca gctggggctc tagggggtat ccccacgcgc
2521 cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg accgctacac
2581 ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc gccacgttcg
2641 ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga tttagtgctt
2701 tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt gggccatcgc
2761 cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat agtggactct
2821 tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat ttataaggga
2881 ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga
2941 attaattctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg
3001 cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg
3061 ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc
3121 gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca
3181 tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctctgcct ctgagctatt
3241 ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc tcccgggagc
3301 ttgtatatcc attttcggat ctgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc gcatgattga
3361 acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga
3421 ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg
3481 gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaggacga
3541 ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt
3601 tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct
3661 gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa tgcggcggct
3721 gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc gcatcgagcg
3781 agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagagcatca
3841 ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg acggcgagga
3901 tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa atggccgctt
3961 ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg acatagcgtt
4021 ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct
4081 ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt
4141 cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca
4201 cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg
4261 gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccacccc
4321 aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca
4381 aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct
4441 tatcatgtct gtataccgtc gacctctagc tagagcttgg cgtaatcatg gtcatagctg
4501 tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata
4561 aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca
4621 ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc
4681 gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg
4741 cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta
4801 tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc
4861 aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag
4921 catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac
4981 caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc
5041 ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt
5101 aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc
5161 gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga
5221 cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta
5281 ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta
5341 tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga
5401 tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc
5461 agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg
5521 aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag
5581 atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg
5641 tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt
5701 tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca
5761 tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca
5821 gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc
5881 tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt
5941 ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg
6001 gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc
6061 aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg
6121 ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga
6181 tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga
6241 ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta
6301 aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg
6361 ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact
6421 ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata
6481 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt
6541 tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa
6601 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtcgacgg atcgggagat
6661 ctcccgatcc cctatggt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCDNA3.1-P53-DB-GST人源基因质粒
别称: TP53
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-P53-DB-GST人源基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6678 bp ds-DNA circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pCDNA3.1-P53-DB-GST
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6678)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6678
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 202..581
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 893..1498
/note="P53-DB"
CDS 1538..2194
/codon_start=1
/product="glutathione S-transferase from Schistosoma
japonicum"
/note="GST"
/translation="MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKK
FELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRY
GVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVL
YMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK"
polyA_signal 2245..2469
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 2515..2943
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2957..3286
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3137..3272
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3353..4147
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4321..4442
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4893..5478)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5649..6509)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6510..6614)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttgccacca tgccttccca
901 gaaaacctac cagggcagct acggtttccg tctgggcttc ttgcattctg ggacagccaa
961 gtctgtgact tgcacgtact cccctgccct caacaagatg ttttgccaac tggccaagac
1021 ctgccctgtg cagctgtggg ttgattccac acccccgccc ggcacccgcg tccgcgccat
1081 ggccatctac aagcagtcac agcacatgac ggaggttgtg aggcgctgcc cccaccatga
1141 gcgctgctca gatagcgatg gtctggcccc tcctcagcat cttatccgag tggaaggaaa
1201 tttgcgtgtg gagtatttgg atgacagaaa cacttttcga catagtgtgg tggtgcccta
1261 tgagccgcct gaggttggct ctgactgtac caccatccac tacaactaca tgtgtaacag
1321 ttcctgcatg ggcggcatga accggaggcc catcctcacc atcatcacac tggaagactc
1381 cagtggtaat ctactgggac ggaacagctt tgaggtgcgt gtttgtgcct gtcctgggag
1441 agaccggcgc acagaggaag agaatctccg caagaaaggg gagcctcacc acgagctggg
1501 atccactagt ccagtgtggt ggaattctgc agatatcatg tcccctatac taggttattg
1561 gaaaattaag ggccttgtgc aacccactcg acttcttttg gaatatcttg aagaaaaata
1621 tgaagagcat ttgtatgagc gcgatgaagg tgataaatgg cgaaacaaaa agtttgaatt
1681 gggtttggag tttcccaatc ttccttatta tattgatggt gatgttaaat taacacagtc
1741 tatggccatc atacgttata tagctgacaa gcacaacatg ttgggtggtt gtccaaaaga
1801 gcgtgcagag atttcaatgc ttgaaggagc ggttttggat attagatacg gtgtttcgag
1861 aattgcatat agtaaagact ttgaaactct caaagttgat tttcttagca agctacctga
1921 aatgctgaaa atgttcgaag atcgtttatg tcataaaaca tatttaaatg gtgatcatgt
1981 aacccatcct gacttcatgt tgtatgacgc tcttgatgtt gttttataca tggacccaat
2041 gtgcctggat gcgttcccaa aattagtttg ttttaaaaaa cgtattgaag ctatcccaca
2101 aattgataag tacttgaaat ccagcaagta tatagcatgg cctttgcagg gctggcaagc
2161 cacgtttggt ggtggcgacc atcctccaaa atgagcggcc gctcgagtct agagggcccg
2221 tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct gttgtttgcc
2281 cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt tcctaataaa
2341 atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg ggtggggtgg
2401 ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg gatgcggtgg
2461 gctctatggc ttctgaggcg gaaagaacca gctggggctc tagggggtat ccccacgcgc
2521 cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg accgctacac
2581 ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc gccacgttcg
2641 ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga tttagtgctt
2701 tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt gggccatcgc
2761 cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat agtggactct
2821 tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat ttataaggga
2881 ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga
2941 attaattctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg
3001 cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg
3061 ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc
3121 gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca
3181 tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctctgcct ctgagctatt
3241 ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc tcccgggagc
3301 ttgtatatcc attttcggat ctgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc gcatgattga
3361 acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga
3421 ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg
3481 gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaggacga
3541 ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt
3601 tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct
3661 gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa tgcggcggct
3721 gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc gcatcgagcg
3781 agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagagcatca
3841 ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg acggcgagga
3901 tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa atggccgctt
3961 ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg acatagcgtt
4021 ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct
4081 ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt
4141 cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca
4201 cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg
4261 gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccacccc
4321 aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca
4381 aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct
4441 tatcatgtct gtataccgtc gacctctagc tagagcttgg cgtaatcatg gtcatagctg
4501 tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata
4561 aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca
4621 ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc
4681 gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg
4741 cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta
4801 tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc
4861 aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag
4921 catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac
4981 caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc
5041 ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt
5101 aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc
5161 gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga
5221 cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta
5281 ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta
5341 tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga
5401 tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc
5461 agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg
5521 aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag
5581 atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg
5641 tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt
5701 tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca
5761 tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca
5821 gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc
5881 tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt
5941 ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg
6001 gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc
6061 aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg
6121 ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga
6181 tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga
6241 ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta
6301 aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg
6361 ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact
6421 ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata
6481 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt
6541 tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa
6601 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtcgacgg atcgggagat
6661 ctcccgatcc cctatggt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
|
|||||||||||
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 （4） P/E 启动子/增强
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
(RabS)作用下与溶酶体融合形成自噬溶酶体的过程，有些溶酶体相关蛋白也参与了其中，包括 LAMP1、LAMP2、UVRAG (紫外线抵抗相关肿瘤抑制基因）。而在降解阶段自噬体蛋白也发挥了重要作用，如 Atg22、Atg12、Atg15、Atg1、Atg13 等。细胞自噬的调节是一个多步骤的极其复杂的过程，目前机制尚未完全掌握，已知它主要是通过mTOR 信号通路、Beclin-1 信号通路、P53 信号通路三条途径来进行调控的。 1） mTOR 信号通路：mTOR 是是一个丝/苏氨酸
pCDNA3.1-P53-DB-GST人源基因质粒
￥100 - 1000
